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2016年33卷第12期  SWINE INDUSTRY SCIENCE  猪业科学主题策划
F E A
T U R E
猪场兽医VETERINARY 我们一直专注研发，以科技创造精品！
猪食道口线虫与猪圆环病毒2型混合
感染的诊断
徐 国，曾智勇*，代振江，叶百川
核酸检测结果阳性参考值阴性(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）
食道口线虫病是由盅口科、食道口属的线虫寄生于反刍家畜和猪的大肠所引起的一类线虫病，由于某些种类的食道口线虫的幼虫可在寄生部位的肠壁上形成结节，故又称为结节虫病[1]。重度感染食道口线虫幼虫可使仔猪发生持续性腹泻，粪便呈暗绿，含有多量黏液，有时带血，严重时引起死亡；慢性病例患畜则表现为便秘和腹泻交替发生，渐进性消瘦，最后可因机体衰竭而死亡。猪圆环病毒病感染是指由猪圆环病毒(Porcine circovirus ，PCV) 引起的猪的一种新的传染病，其主要临床症状特征为母猪繁殖障碍、体质下降、消瘦、呼吸困难、贫血、黄疸、生长发育不良、腹泻、内脏器官及皮肤的广泛病理变化，特别是肾、脾脏及全身淋巴结的高度肿大、出血和坏死[2]。PCV 分PCV1和PCV2两个血清型，PCV2危害极大。猪圆环病毒自2000年由郎洪武等[3]在国内首次报道以来，全国各省（市）先后有PCV2 感染病例报道 。猪圆环病毒病在世界范围内广泛流行，给养猪业带来巨大危害。2016年6月贵州省遵义市某种猪场发生一起猪严重腹泻导致猪只死亡的病例。笔者通过猪场工作人员对猪场饲养情况、免疫程序以及病死猪的临床症状进行了解后开展了相关检测，报道如下。1　材料1.1　病料病死猪一头。1.2  主要试剂TakaRa Mini BEST Viral RNA/基金项目：省校合作计划项目, 黔科合LH 字[2014]7670号
作者简介：徐国（1988—），男，在读硕士，研究方向：动物传染病病原分子生物学通讯作者：曾智勇（1978—），男，教授，博士，硕士生导师，从事动物传染病病原分子生物学研究D N A  E x t r a c t i o n  K i t  V e r  4.0、P r i m e  S c r i p t  O n e  S t e p  R T -PCR Kit Ver.2.0、DL2000；其他试剂均为国
产分析纯。2　方法2.1　流行病学调查与临床症状通过猪场工作人员对猪场饲养情况、免疫程序以及病死猪的临床症状进行了解并记录。2.2　解剖病变观察对病死猪进行剖检，沿腹白线切开，观察宿主肠道及其他组织器官病理变化，剖解肠道进行虫体采集。2.3　病原核酸检测2.3 .1　病料的处理及核酸的提取采集送检病死猪组织混合样品，碾磨匀浆，反复冻融3次之后，12 000 r/min 离心10 min，取上清，用TakaRa Mini BEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 4.0试剂盒提取核酸。2.3.2  引物合成相关引物为由本实验室所保存的参考GenBank 中关于CSFV(猪瘟病毒)、PCV2和PRRSV(猪繁殖与呼吸综合征病毒)序列设计并合成的特异性引物[4]。2.3.3　病原检测参照一步法RT-PCR 试剂盒说明书，对CSFV、PCV2和PRRSV 进行PCR 扩增。反应总体系为50 μL ：2×1 Step Buffer 25 μL，模板7.0 μL，上下游引物各1.0 μL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 μL，Release Free H 2O 14 μL ；反应条件均为：50 ℃ 40 min ； 95 ℃ 5 min ；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35个循环；72 ℃ 10 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测。3　结果
3.1　流行病学调查结果与临床症状该猪场存栏生猪300头左右，已对CS、PRRS、PR 和FMD 进行了普免，未曾免疫PCV2。据述，该猪场仔猪少数4～5 d，多数断奶后开始腹泻，粪便呈暗绿，含有多量豁液，持续性腹泻，消瘦，生长迟缓，抗生素无效，病程长的发病10 d 后才死亡，吻突两边有黑痂块。
3.2　解剖病变观察结果解剖后可见脾脏柔软、边缘锐薄，肺脏表面塌陷；结肠可见大量白米粒大小的
结节；肠系膜淋巴结肿大、出血；剖解肠道采集到了结节虫虫体；其余脏器未见明显病理变化（见图1）。3.3　病原核酸检测结果通过对送检样品进行病原核酸检测（见图2）。电泳结果显示，CSFV 和PRRSV 的检测结果均为阴性；PCV2检测结果为阳性，扩增条带与预期的1767 bp 扩增片段相符，表明送检病死猪存在PCV2感染。 4　小结
结合临床解剖特征及病原检测结果可知，送检病死猪存在猪食道口线虫和
猪圆环病毒2型（PCV2）混合感染。临床腹泻可能与PCV2引起的多系统衰
竭综合征（PMWS）和寄生虫感染均有一定关系，其中与猪结节虫的感染关系
更为密切。食道口线虫幼虫在大肠黏膜
下形成结节所致的危害最大，形成结节的幼虫周围发生局部性炎症，当继发细
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VETERINARY
菌感染时，则发生化脓性结节性大肠炎。
因此，建议一方面要加强猪的基础免
疫，做好免疫效果及时监测；另一方面
要注重加强猪场养殖环境卫生及消毒和
驱虫。抓好母猪配种前、产仔前、哺乳
仔猪和保育猪四个阶段的驱虫。每个阶
段内服伊维菌素或阿维菌素，每千克体
重0.3 mg（或按厂家产品推荐剂量），连服5～7 d。参考文献[1] 杨光友.动物寄生虫病学[M].3版.成都﹕四川科学技术出版社,2009.1(2013.2年重印)﹕158.[2] 陈溥言.兽医传染病学[M].5版.北京﹕中国农业出版社,2006.8(2014.6重印)﹕231.[3] 郎洪武，张广川，吴发权，等. 断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测[J].中国兽医科技,2000（3）﹕3-5. [4] ZENG Z, LIU Z, WANG W, et al. Establishment and application of a multiplex PCR for rapid and simultaneous  detection of six viruses in swine[J]. Journal of Virological Methods, 2014, 208﹕102–106.（收稿日期：
2016-09-20）图1　解剖病变结果
图2　病原检测结果A: 脾脏柔软、肺脏表面塌陷；B: 结肠见白结节；C: 肠系膜淋巴结肿大、出血
M ：DL2000 Maker ；1：CSFV 检测结果，阴性；2：PCV2检测结果，阳性 ；3：PRRSV 检测结果，
阴性不同猪圆环病毒2型疫苗对生长育肥猪生
产性能的影响
唐一波，于俊勇，陈远鹏，杨 海，付四友，伍少钦*
(广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场，广西  横县 530137）
基金项目：广西自然科学基金项目（桂科重14121003-2-3）; 项目名称：广西科学研究与技术开发项目合同重大专项计划; 合同编号：桂科重14121003-2-3
摘  要：试验通过免疫不同猪圆环病毒2型疫苗，比较3种不同疫苗对生长猪育肥阶段生产性能和经济效益的影响。试验表明：在生长育肥前期，疫苗免疫组与空白对照组在提高猪的生长性能效果上差异不显著，生长育肥中后阶段，猪圆环病毒疫苗免疫组能有效地提高猪的生长性能，降低生产成本；猪圆环病毒疫苗免疫能降低育肥猪各个生长阶段的增重变异系数，提高猪的均匀度，且某进口基因工程疫苗的变异系数最低，重复性好；某国产灭活苗免疫组，能有效地提高猪的经济效益。
关键词：圆环病毒2型；生长育肥猪；生产性能；经济效益
猪圆环病毒分为 PCVl 和 PCV2血
清型。其中猪圆环病毒( PCV1) 最初研
究发现在猪中广泛传播，但是没有出
现临床病例，认为对猪不具有致病性[1]。
随后，1991年学者们从断奶仔猪多系统
衰竭综合征（PMWS）病猪组织中分离
出了在分类学和血清学上与PCV1具有
显著差异的PCV 病毒，命名为PCV2，被认为是引发PMWS 病的主要病原[2]。PCV2感染后不仅会导致断奶仔猪发生PMWS 还与其他猪易感疾病密切相关[3]。有报道显示，猪感染PCV2后，病原可以破坏动物机体的免疫系统，造成严重的免疫抑制，容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染，给疾病的诊断和带来巨大的困难。PCV2与猪皮炎肾病综合征（PDNS）、猪呼吸系统混合疾病（PRDC）、猪繁殖障碍症、肉芽肿性肠炎、急性肺水肿（APE）、增生性坏死性肺炎（PNP）密切相关[4]。由此，对PCV2的危害性不能孤立而言。国内外研究结果还显示，猪圆环病毒病（PCVD）与其他重要疾病病原，如猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合
征病毒（PRRSV）、副猪嗜血杆菌、猪
肺炎支原体、猪链球菌多杀性巴氏杆菌
等的继发感染有很强的关联。PCVD 的