lncRNA HOXC -AS3吸附miR -216a -5p 促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的机制研究①
陈吉柏
范长玲
张
浩（海南省儋州市人民医院胸心肿瘤外科，儋州571799）
中图分类号R734.2
文献标志码
A
文章编号
1000-484X （2021）09-1082-07
［摘要］目的：探讨lncRNA HOXC -AS3对非小细胞肺癌（NSCLC ）细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法：
qRT -PCR 检测肺癌组织和肺癌细胞H1299、A549和GLC -12中lncRNA HOXC -AS3和miR -216a -5p 水平，A549细胞中转染HOXC -AS3小干扰RNA （si -HOXC -AS3）、HOXC -AS3过表达载体（pcDNA -HOXC -AS3）或miR -216a -5p 抑制剂（anti -miR -216a -5p ）以沉默、过表达lncRNAHOXC -AS3或干扰miR -216a -5p ，CCK -8法检测细胞增殖，Transwell 和划痕实验检测细胞迁移和侵袭，Western blot 检测细胞增殖抗原Ki -67、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、基质金属蛋白酶2（MMP -2）、基质金属蛋白酶9（MMP -9）、神经型钙黏蛋白（N -cadherin ）、波形蛋白（Vimentin ）和上皮型钙黏蛋白（E -cadherin ）表达，双荧光素酶报告系统验证lncRNA HOXC -AS3与miR -216a -5p 靶向关系。结果：与癌旁组织（45例）和人正常肺上皮细胞BEAS -2B 相比，肺癌组织和肺癌细胞H1299、A549和GLC -12中lncRNA HOXC -AS3水平上升，miR -216a -5p 水平降低（P <0.05）；沉默lncRNA HOXC -AS3可抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT ），降低细胞Ki -67、Cyclin D1、MMP -2、MMP -9、N -cadherin 和Vimentin 蛋白表达，提高E -cadherin 蛋白表达，过表达lncRNA HOXC -AS3可促进A549细胞增殖、迁移、侵袭和EMT ；lncRNA HOXC -AS3靶向吸附miR -216a -5p ；干扰miR -216a -5p 部分逆转沉默lncRNA HOXC -AS3对A549细胞增殖、迁移、侵袭及EMT 的抑制作用。结论：ln⁃cRNA HOXC -AS3通过吸附miR -216a -5p 促进NSCLC A549细胞增殖、迁移、侵袭和EMT ，是肺癌的潜在分子靶点。
［关键词］非小细胞肺癌；lncRNA HOXC -AS3；miR -216a -5p ；增殖；迁移；侵袭；上皮间质转化
Mechanism research of lncRNA HOXC -AS3inhibiting cell proliferation ，migration and invasion of non -small cell lung cancer cells by targeting miR -216a -5p
CHEN Ji -Bo ，FAN Chang -Ling ，ZHANG Hao.Department of Cardiothoracic Tumor Surgery ，People′s Hospital of Danzhou City ，Hainan Province ，Danzhou 571799，China
［Abstract ］Objective ：To investigate effects of lncRNA HOXC -AS3on proliferation ，migration and invasion of non -small cell lung cancer （NSCLC ）cells and molecular mechanism.Methods ：Levels of lncRNA HOXC -AS3and miR -216a -5p in lung cancer tis⁃sues and H1299，A549and GLC -12cells were detected by qRT -PCR.A549cells were transfected with si -HOXC -AS3，pcDNA -HOXC -AS3or anti -miR -216a -5p to silence ，overexpress lncRNAHOXC -AS3or interfere miR -216a -5p.Cell proliferation of A549cells was detected by CCK -8assay.Cell migration and invasion of A549cells were detected by Transwell assay and scratch test.Protein ex⁃pressions of Ki -67，Cyclin D1，MMP -2，MMP -9，N -cadherin ，Vimentin and E -cadherin were determined by Western blot.Dual -lucif⁃erase reporter assay system was performed to verify targeting relationship between lncRNA HOXC -AS3and miR -216a -5p.Results ：Compared with adjacent tissues （45cases ）and human normal lung epithelial cells BEAS -2B ，levels of lncRNA HOXC -AS3in lung cancer tissues and lung cancer H1299，A549and GLC -12cells were increased ，while levels of miR -216a -5p wer
e decreased （P <0.05）.Silencing lncRNA HOXC -AS3inhibited proliferation ，migration ，invasion and epithelial -mesenchymal transition （EMT ）of A549cells ，reduced protein expressions of Ki -67，Cyclin D1，MMP -2，MMP -9，N -cadherin and Vimentin ，and increased expression of E -cadherin.Over -expression of lncRNA HOXC -AS3promoted proliferation ，migration ，invasion and EMT of A549cells.lncRNA HOXC -AS3sponged and regulated expression of miR -216a -5p.Interference with miR -216a -5p partially reversed inhibitory effect of ln⁃cRNA HOXC -AS3silenced on proliferation ，migration ，invasion and EMT of A549cells.Conclusion ：lncRNA HOXC -AS3promoted proliferation ，migration and invasion of A549cells by targeting miR -216a -5p ，which is a potential molecular target for NSCLC.
［Key words ］Non -small cell lung cancer ；lncRNA HOXC -AS3；miR -216a -5p ；Proliferation ；Migration ；Invasion ；Epithelial -mesenchymal transition
肺癌是世界第一大癌症，在恶性肿瘤中致死率最高，且患者数呈逐年上升趋势，非小细胞肺癌（non -small cell lung cancer ，NSCLC ）患者占患者总数的85%左右，5年生存率低于15%［1-2］。手术和靶向是肺癌个性化的主要手段，研究肺癌细胞
doi ：10.3969/j.issn.1000-484X.2021.09.011
①本文为海南省卫健委科研项目（1605032027A2001）。
作者简介：陈吉柏，男，主治医师，主要从事胸部肿瘤诊疗方面的研
究，E -mail ：mhnqs05@163 。
通信作者及指导教师：张
浩，男，硕士，主任医师，主要从事心胸外科常见病诊疗方面的研究，E -mail ：zzhh1279@163 。
增殖和转移的分子机制是肺癌基础研究的热点。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在肿瘤中通常表达失调，参与肺癌、乳腺癌、肝癌、结直肠癌及血液系统恶性肿瘤、神经母细胞瘤等肿瘤发生、发展及耐药等过程［3］。多种lncRNA在肺癌中差异表达，参与癌细胞增殖、迁移、凋亡等多种生理过程［4］。HOXC-AS3是一种位于染体7p13区域的
lncRNA，在胃癌、胶质母细胞瘤和乳腺癌等肿瘤组织中高表达，与肿瘤细胞增殖、转移、侵袭有关［5-7］。lncRNA HOXC-AS3在肺癌中表达和作用尚未明确。本研究通过starBase预测发现miR-216a-5p可能是lncRNA HOXC-AS3的靶点，miR-216a-5p在小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）中表达下调，与SCLC恶性进展和化学耐药相关［8-9］。lncRNA HOXC-AS3和miR-216a-5p
在肺癌中的关系尚未明确。本研究检测两者在肺癌组织和细胞系中的含量，假设lncRNA HOXC-AS3可靶向miR-216a-5p调控肺癌细胞增殖、侵袭和迁移，并对此进行验证，以期为肺癌提供新靶点。
1资料与方法
1.1资料
1.1.1研究对象选取2017年1月至2018年6月于本院病理检查确诊为NSCLC的患者手术切除的肺癌组织及癌旁组织（距离肺癌组织边缘>1.5cm）各45例，男性30例，女性15例，年龄23~76岁，平均年龄（51.20±16.22）岁，鳞癌28例，腺癌15例，其他2例。NSCLC分级：Ⅰ级5例，Ⅱ级12例，Ⅲ级19例，Ⅳ级20例。NSCLC诊断标准参照《非小细胞肺癌临床指南》，所有患者术前未接受放化疗。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有患者知情同意。1.1.2细胞、主要试剂与仪器人肺癌细胞系H1299、A549、GLC-12和人正常肺上皮细胞株BEAS-2B（ATCC）；胎牛血清、DMEM培养基（Gibco公司）；胰蛋白酶（Sigma-Aldrich公司）；Transwell板（美国Corning公司）；细胞增殖抗原Ki-67、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）抗体（美国Santa cruz公司）；引物、lncRNA HOXC-AS3小干扰RNA（si-HOXC-AS3）及其阴性对照、ln
⁃cRNA HOXC-AS3过表达载体（pcDNA-HOXC-AS3）及对照空载体（overexpression control）、miR-216a-5p 模拟物（mimics）及阴性对照序列（miR-con）、miR-216a-5p抑制剂（anti-miR-216a-5p）及抑制剂阴性对照序列（anti-miR-con）、lncRNA HOXC-AS3野生型（WT-HOXC-AS3）和突变型（MUT-HOXC-AS3）报告载体（上海吉玛制药有限公司）；双荧光载体双荧光素酶报告系统试剂盒（美国Promega公司）；Lipo⁃fectamine2000、RNA提取试剂Trizol、Real-time PCR 试剂盒、反转录试剂盒（RT-PCR）（美国Invitrogen公司）；CCK-8试剂盒、BCA蛋白检测试剂盒（上海碧云天）；Real-time PCR仪（美国Bio-Rad公司）。
1.2方法
1.2.1细胞培养H1299、A549、GLC-12和BEAS-2B细胞培养于含10%FBS、1%青-链霉素的DMEM 培养基，培养条件：37℃、5%CO2、湿度97%，每2~3d 更换1次培养基。当细胞生长至80%融合时，
0.25%胰蛋白酶消化，收集细胞进行后续实验。
1.2.2qRT-PCR检测lncRNA HOXC-AS3和miR-216a-5p表达Trizol试剂提取总RNA，微量核算仪检测RNA纯度和浓度，按照反转录试剂盒说明书合成cDNA，以cDNA为模板进行qRT-PCR反应。反应程序为：94℃预变性4min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸40s，共35个循环。引物序列：lncRNA HOXC-AS3F：5′-CACCTCTCTCATCGAAA-AACCG-3'，R：5'-GCACCAGGAAAGAGGACA
ATT-C-3'；β-actin F：5'-CTCCATCCTGGCCTCGCTGT-3'，R：5'-GCTGCTACCTTCACCGTTCC-3'；miR-216a-5p F：5'-TAATCTCAGCTGGCAACT-3'，R：5'-GGTGTC⁃GTGGAGTCG-3'；U6F：5'-TGCGGGTGCTCGCTTCG⁃GCAGCA-3'，R：5'-CCACTGCAGGGTCCGAGGT-3'。lncRNA HOXC-AS3以β-actin为内参，miR-216a-5p 以U6为内参，2−ΔΔCt法计算。
1.2.3细胞转染将对数生长期A549细胞调整为1×104个/ml，2.5ml/孔接种于6孔板，当生长至60%融合时，更换不含FBS的DMEM培养基。根据转染说明书将Silence control、si-HOXC-AS3、overex⁃pression control、pcDNA-HOXC-AS3、si-HOXC-AS3与anti-miR-con、si-HOXC-AS3与anti-miR-216a-5p 分别转染至A549细胞中，依次记为si-con组、si-HOXC-AS3组、pcDNA组、pcDNA-HOXC-AS3组、si-HOXC-AS3+anti-miR-con组、si-HOXC-AS3+anti-miR-216a-5p组。转染6h后更换新鲜培养基，继续培养至48h，收集细胞用于后续实验。
1.2.4CCK-8法测定细胞存活率转染后的各组细胞调整为1×104个/ml，200µl/孔接种于96孔板，培养48h后，20µl/孔加入CCK-8溶液，继续培养
2h，酶标仪测定450nm处吸光度（A），细胞存活
率（%）=A
实验组/A对照组×100%。
1.2.5Western blot检测增殖、凋亡、迁移和侵袭相关蛋白表达转染后的各组细胞调整为1×104个/ml，1.0ml/孔接种于24孔板，培养48h后，胰蛋白酶消化，收集细胞，加入RIPA细胞裂解液冰上孵育20min，充分裂解后，4℃、12000r/min离心10min，-80℃保存备用。BCA法测定上清中蛋白含量，取适量蛋白溶液，加入1×上样缓冲液，混合均匀，100℃煮沸5min，蛋白变性后，进行SDS-PAGE凝胶电泳，电转至PVDF膜，5%脱脂奶粉室温封闭2h，分别加入Ki-67（1：1000）、Cyclin D1（1：1000）、MMP-2（1：2000）、MMP-9（1：2000）、N-cadherin（1：1000）、Vi⁃mentin（1：1000）、E-cadherin（1：1000）和β-actin（1：5000）一抗，4℃孵育过夜，TBST洗膜3次，5min/次。加入辣根过氧化酶标记二抗（1：1000），室温孵育2h，加入ELC化学发光试剂，避光显影后凝胶成像系统曝光拍照。以β-actin为内参，Image J软件分析蛋白条带灰度值。目的蛋白的相对表达水平以其蛋白条带灰度值与β-actin蛋白条带灰度值的比值表示。
1.2.6Transwell实验检测细胞迁移和侵袭迁移实验：转染后的各组细胞用不含血清的DMEM培养基调整浓度为2×105个/ml，Transwell小室置于24孔板，下室加入500µl含10%FBS培养基，上室加入100µl细胞悬液，培养48h后弃培养基，取出小室，棉签擦去基质胶和上层小室细胞，4%甲醛固定30min，0.4%结晶紫染15min，显微镜观察。随机选取5个视野计数。侵袭实验：将-20℃取出的Matrigel液化后用4℃无血清培养基以1：8比例稀释，取50µl加入Transwell小室上室，自然晾干，加入100µl细胞悬液，下室加入500µl含10%FBS的培养基，后续操作同迁移实验。
1.2.7划痕实验检测细胞迁移能力用marker笔在6孔板背后均匀划5条直线，横穿过孔，调整细胞浓度为1×104个/ml，2.5ml/孔接种于6孔板，当细胞生长至80%融合时，弃培养基，200µl无菌头尖端在各孔相同位置划线，PBS冲洗3次，去除划下的细胞，每孔加入无血清培养基培养24h，拍照，计算细胞划痕愈合率。
1.2.8双荧光素酶报告实验生物信息学软件预测显示lncRNA HOXC-AS3与miR-216a-5p的核苷酸序列存在连续结合位点，PCR扩增含miR-216a-5p结合位点的lncRNA HOXC-AS3序列，构建lncRNA HOXC-AS3的野生型（WT-HOXC-AS3）载体。采用
基因突变技术将结合位点突变后，构建lncRNA HOXC-AS3突变型（MUT-HOXC-AS3）载体。分别将WT-HOXC-AS3、MUT-HOXC-AS3与miR-con或miR-216a-5p共转染至A549细胞，转染6h后更换新鲜培养基，继续培养48h，收集细胞，裂解，离心收集上清，-20℃保存或直接检测荧光素酶活性。以海肾荧光素酶活性为内参，计算相对萤火虫荧光素酶活性。
1.3统计学处理采用SPSS19.0软件进行数据处理和分析，所有数据以xˉ±s表示，两组间比较采用t 检验，多组间比较进行单因素方差分析，总体差异采用LSD-t检验进行两两比较。以P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.1lncRNA HOXC-AS3和miR-216a-5p在肺癌组织和A549、A549、GLC-12细胞系中的表达与癌旁组织（45例）相比，肺癌组织组中lncRNA HOXC-AS3水平显著上升，miR-216a-5p水平显著下降（P<0.05）；与人正常肺上皮细胞BEAS-2B组相比，肺癌细胞H1299、A549和GLC-12组中miR-216a-5p水平下降，lncRNA HOXC-AS3水平显著上升（P<0.05，表1、2）。体外细胞实验选择水平差异较大的A549细胞进行。
2.2沉默或过表达lncRNA HOXC-AS3对肺癌A549细胞增殖的影响与si-con组相比，si-HOXC-AS3组A549细胞lncRNA HOXC-AS3表达和细胞活性显著降低，增殖蛋白Ki-67和Cyclin D1表达显著降低（P<0.05）；过表达lncRNA HOXC-AS3的pcD⁃NA-HOXC-AS3组则结果相反，见图1、表3。
2.3沉默或过表达lncRNA HOXC-AS3对肺癌A549细胞迁移的影响与si-con组相比，si-lncRNA HOXC-AS3组MMP-2和MMP-9含量、迁移细胞数和侵袭细胞数显著下降，细胞划痕愈合率降低（P< 0.05）；过表达lncRNA HOXC-AS3的pcDNA-HOXC-表1lncRNA HOXC-AS3和miR-216a-5p在肺癌组织和癌旁组织中的表达（xˉ±s，n=45）
Tab.1Expressions of lncRNA HOXC-AS3and miR-216a-5p in lung cancer tissues and adjacent tissues
（xˉ±s，n=45）
Groups
Adjacent tissues
Lung cancer tissue
t
P
lncRNA HOXC-
AS3/β-actin
0.94±0.27
3.28±0.671）
21.383
0.000
miR-216a-5p/U6
1.03±0.19
0.66±0.131）
10.781
0.000 Note：Compared with adjacent tissues group，1）P<0.05.
AS3组则结果相反（图2、表4）。2.4
沉默或过表达lncRNA HOXC -AS3对肺癌
A549细胞EMT 的影响
如图3所示，与si -con 组相
比，si -lncRNA HOXC -AS3组A549细胞N -cadherin 和
Vimentin 蛋白含量降低，E -cadherin 蛋白含量升高
表2
lncRNA HOXC -AS3和miR -216a -5p 在正常肺上皮细胞株和肺癌细胞株中的表达（x ˉ±s ，n =9）
proliferationTab.2Expressions of lncRNA HOXC -AS3and miR -216a -5p in normal lung epithelial cell lines and lung can⁃cer cell lines （x ˉ±s ，n =9）
Groups BEAS -2B H1299A549GLC -12
F P lncRNA HOXC -AS3/β-actin 1.02±0.234.15±0.591）
5.25±0.421）3.81±0.641）
118.1550.000
miR -216a -5p /U6
1.04±0.120.42±0.081）0.36±0.111）0.55±0.091）
83.6710.000
Note ：Compared with the BEAS -2B group ，1）P <0.
05.
图1
Western blot 检测沉默或过表达lncRNA HOXC -AS3对肺癌A549细胞增殖蛋白Cyclin D1和Ki -67表达的影响Fig.1
Effects of silenced or overexpressed lncRNA HO -XC -AS3on expressions of proliferation proteins Cyclin D1and Ki -67in lung cancer A549cells de⁃tected by Western blot
Note ：Compared with silence control group ，*.P <0.05；compared with
overexpression control group ，#.P <0.05.
表3
沉默或过表达lncRNA HOXC -AS3对肺癌A549细胞
增殖的影响（x ˉ±s ，n =9）Tab.3
Effects of silenced or overexpressed lncRNA HOXC -AS3on proliferation of lung cancer A549cells
（x ˉ±s ，n =9）
Groups NC
silence control si -HOXC -AS3
overexpression control pcDNA -HOXC -AS3
F P lncRNA HOXC -AS3/β-actin 0.98±0.131.02±0.120.23±0.05
1）
0.98±0.115.06±0.642）368.9680.000Cell
viability （%）
99.14±7.7294.69±9.1668.67±5.341）
95.86±9.37162.74±7.612）
172.6090.000
Note ：Compared with silence control group ，1）P <0.05；compared with
overexpression control group ，2）P <0.
05.
图2Western blot 检测沉默或过表达lncRNA HOXC -AS3对肺癌A549细胞MMP -2和MMP -9表达的影响Fig.2
Effects of silenced or overexpressed lncRNA HOXC -AS3on expressions of proliferation pro⁃teins MMP -2and MMP -9in lung cancer A549cells detected by Western blot
Note ：Compared with silence control group ，*.P <0.05；compared with
overexpression control group ，#.P <0.
05.
图3Western blot 检测肺癌细胞E -cadherin 、N -cadherin 和Vimentin 蛋白表达
Fig.3
Expressions of E -cadherin ，N -cadherin and Vimen⁃tin proteins in lung cancer A549cells detected by Western blot
Note ：Compared with silence control group ，*.P <0.05；compared with
overexpression control group ，#.P <0.05.
表4
沉默或过表达lncRNA HOXC -AS3对肺癌细胞A549
迁移和侵袭的影响（x ˉ±s ，n =9）
Tab.4Effects of silenced or overexpressed lncRNA
HOXC -AS3on migration and invasion of lung can⁃
cer A549cells （x ˉ±s ，n =9）
Groups NC
silence control si -HOXC -AS3
overexpression control pcDNA -HOXC -AS3
F P Cell migration number
183.86±10.25174.54±14.35103.30±7.251）
181.56±13.36
264.67±18.312）167.8150.000Cell invasion number
78.85±7.4184.49±9.4847.30±7.801）
82.32±9.67147.55±7.762）
166.8960.000Cell scratch heal⁃ing rate （%）
88.34±4.4286.35±4.6474.87±3.131）84.35±4.3495.64±5.672）
24.6140.000Note ：Compared with silence control group ，1）P <0.05；compared with
overexpression control group ，2）P <0.05.
（P <0.05）；过表达lncRNA HOXC -AS3的pcDNA -HOXC -AS3组则结果相反。2.5lncRNA HOXC -AS3靶向作用于miR -216a -
5p
如图4所示，starBase 预测结果显示，lncRNA
HOXC -AS3序列中存在与miR -216a -5p 互补的核苷
酸序列。双荧光素酶报告系统结果显示，与miR -con 组相比，miR -216a -5p 组野生型WT -HOXC -AS3的荧光素酶相对活性显著下降（P<0.05）；而突变型MUT -HOXC -AS3的荧光素酶相对活性变化无统计学意义（表5）。qRT -PCR 结果显示，沉默HOXC -AS3
可上调miR -216a -5p 含量，过表达HOXC -AS3可下调miR -216a -5p 含量（P <0.05，表6）。2.6
干扰miR -216a -5p 部分逆转沉默HOXC-AS3
对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用
如图5、
表7所示，与si -HOXC -AS3+anti -miR -con 组相比，si -HOXC -AS3+anti -miR -216a -5p 组miR -216a -5p 水平显著下降，A549细胞活性和细胞划痕愈合率升高，
表5
双荧光素酶报告实验（x ˉ±s ，n =9）
Tab.5
Dual luciferase reporter assay （x ˉ±s ，n =9）
Groups
miR -con
miR -216a -5p
t P
WT -HOXC -AS30.99±0.100.59±0.071）
9.8310.000MUT -HOXC -AS31.14±0.161.22±0.151.0940.290
Note ：Compared with miR -con group ，1）P <0.05.
表7沉默HOXC -AS3和过表达miR -216a -5p 对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响（x ˉ±s ，n =9）
Tab.7Effects of silencing HOXC -AS3and overexpressing miR -216a -5p on proliferation ，migration and invasion of lung cancer A549cells （x ˉ±s ，n =9）
Groups
si -HOXC -AS3+anti -miR -con
si -HOXC -AS3+anti -miR -216a -5p
F P
miR -216a -5p /U6
1.03±0.140.69±0.081）
6.3260.000Cell
viability （%）
101.45±8.67
153.28±12.371）10.2930.000
Cell migration number
128.68±11.26
163.63±13.341）6.0060.000Cell invasion number
46.47±5.39
71.66±6.821）
8.6930.000Cell scratch
healing rate （%）73.73±4.9682.87±5.641）
3.6510.002Note ：Compared with si -HOXC -AS3+anti -miR -con group ，1）P <0.
05.
图5Western blot 检测肺癌细胞Ki -67、Cyclin D1、MPP -2、MPP -9、E -cadherin 、N -cadherin 和Vimentin 蛋白表达Fig.5
Expression of Ki -67，Cyclin D1，MPP -2，MPP -9，E -cadherin ，N -cadherin and Vimentin proteins in lung cancer A549cells detected by Western blot
Note ：Compared with si -HOXC -AS3+anti -miR -con group ，*.P <0.05.
表6沉默和过表达HOXC -AS3对miR -216a -5p 表达的影响（x ˉ±s ，n =9）
Tab.6Effects of silence and overexpression of lncRNA HOXC -AS3on expression levels of miR -216a -5p （x ˉ±s ，n =9）
Groups
silence control si -HOXC -AS3overexpression control pcDNA -HOXC -AS3
F P miR -216a -5p /U60.98±0.13
4.27±0.351）1.03±0.090.35±0.052）750.9980.000Note ：Compared with silence control group ，1）P <0.05；compared with
overexpression control group ，2）P <0.
05.
图4lncRNA HOXC -AS3与miR -216a -5p 的靶向结合位点Fig.4
Binding sites of lncRNA HOXC -AS3targeting with miR -216a -5p
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