DH10BAC感受态制备方法
在含有Kan和Tet抗性LB平板上划线，37度培养过夜；
挑取单菌落，接种至3ml Kan和Tet抗性LB，280rpm，37度培养至OD600约0.4；
转接1ml至40ml Kan和Tet抗性LB中，280rpm，37度培养至OD600约0.4；
冰浴10min；
倒入预冷的50ml离心管中，4度约3000g离心5min；
弃上清，加入预冷的约20ml的0.1M的CaCl2，悬浮后，4度约3000g离心5min；
加入约20ml，预冷的约20ml的0.1M的CaCl2，悬浮后，冰上放30min，4度约5000g离心5min；
加入约2ml的预冷的0.1M的CaCl2，悬浮后，加入甘油，分装保存。
挑取单菌落，接种至3ml Kan和Tet抗性LB，280rpm，37度培养至OD600约0.4；
转接1ml至40ml Kan和Tet抗性LB中，280rpm，37度培养至OD600约0.4；
冰浴10min；
倒入预冷的50ml离心管中，4度约3000g离心5min；
弃上清，加入预冷的约20ml的0.1M的CaCl2，悬浮后，4度约3000g离心5min；
加入约20ml，预冷的约20ml的0.1M的CaCl2，悬浮后，冰上放30min，4度约5000g离心5min；
加入约2ml的预冷的0.1M的CaCl2，悬浮后，加入甘油，分装保存。
DH5a感受态的制作方法：
1. CaCl2法
1).从－80℃冰箱取DH5α菌种，无菌操作台中在LB（无抗生素）平板上划线，37℃生化培养箱过夜培养（14－16h）。然后取出置于4℃至少2h；
1. CaCl2法
1).从－80℃冰箱取DH5α菌种，无菌操作台中在LB（无抗生素）平板上划线，37℃生化培养箱过夜培养（14－16h）。然后取出置于4℃至少2h；
2）从新鲜平板上挑取一个单菌落，转到含有4ml LB液体培养基的试管中，37℃振荡培养6－8h，然后放到4℃至少2h；37度
3).将菌液按1：50－100的比例接种到50ml LB培养基中，37℃ 220rpm配养至OD600约为0.3到0.5（对数生长前期或对数生长期），然后置于冰浴中20min；
4). 无菌操作台中，用预冷的50ml离心管收集菌液，4℃ 4500rpm 离心5min；
5).弃上清，于超净台中倒置10－20s，控干管壁上的液滴；
6).用预冷的10ml 0.1M CaCl2重悬菌体，冰水浴10min，然后4℃ 4500rpm 离心5min；弃上清，于超净台中倒置10－20秒，控干管壁上的液滴；
7). 加入预冷的0.1MCaCl2 2ml/管，轻轻重悬菌体，置于冰水浴中15min；
9).立即取50μl新鲜制备的感受态细胞转化质粒或连接产物；
10).转化结束后14小时左右观察转化平板，检测转化效率；
11).取出置于冰水浴中的感受态细胞，加入预冷的甘油至15℅，混匀后以50μl/管分装至4℃预冷的无菌微量离心管中，立即置于-80℃保存。
3).将菌液按1：50－100的比例接种到50ml LB培养基中，37℃ 220rpm配养至OD600约为0.3到0.5（对数生长前期或对数生长期），然后置于冰浴中20min；
4). 无菌操作台中，用预冷的50ml离心管收集菌液，4℃ 4500rpm 离心5min；
5).弃上清，于超净台中倒置10－20s，控干管壁上的液滴；
6).用预冷的10ml 0.1M CaCl2重悬菌体，冰水浴10min，然后4℃ 4500rpm 离心5min；弃上清，于超净台中倒置10－20秒，控干管壁上的液滴；
7). 加入预冷的0.1MCaCl2 2ml/管，轻轻重悬菌体，置于冰水浴中15min；
9).立即取50μl新鲜制备的感受态细胞转化质粒或连接产物；
10).转化结束后14小时左右观察转化平板，检测转化效率；
11).取出置于冰水浴中的感受态细胞，加入预冷的甘油至15℅，混匀后以50μl/管分装至4℃预冷的无菌微量离心管中，立即置于-80℃保存。
四环素（工作浓度：10ug/ml）：称0.1g溶于10ml双蒸水（高压）中，分装1ml/管（10mg/ml），置于-20℃保存，千分之一稀释。
庆大霉素（工作浓度：7ug/ml）：称0.7g溶于10ml双蒸水（高压）中，分装1ml/管（70mg/ml），置于-20℃保存，万分之一稀释。
IPTG：工作浓度：40ug/ml.
x-gal: 工作浓度：100ug/ml.
Kana: 工作浓度：50ug/ml.
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