ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．１１．１０
㊃新型冠状病毒肺炎㊃
基于大规模人新型冠状病毒核酸检测的经验介绍
㊀㊀㊀㊀通信作者：薛娴，研究实习员，硕士，南京医科大学第二附属医院医学遗传科，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｘｉａｎｘｕｅ＠ｎｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ㊂
江苏省援疆核酸检测医疗队
摘要：根据国家新型冠状病毒肺炎（ＣＯＶＩＤ⁃１９）疫情防治工作需要，为全力支援新疆新型冠状病毒（２０１９⁃ｎＣｏＶ）核酸检测工作，２０２０年７月１７日江苏省紧急组建了第一批省核酸检测医疗队驰援新疆㊂该文总结第一批核酸检测队在新疆２０１９⁃ｎＣｏＶ核酸检测工作的经验，为未来可能出现的ＣＯＶＩＤ⁃１９或其他突发公共卫生事件的大规模人筛查工作提供参考㊂关键词：新型冠状病毒；核酸检测；大规模筛查中图分类号：Ｒ４４６㊀㊀㊀㊀文献标志码：Ａ
㊀㊀根据新型冠状病毒肺炎（ＣＯＶＩＤ⁃１９）疫情防治工作需要，为全力支援新疆新型冠状病毒（２０１９⁃ｎＣｏＶ）筛查工作，
２０２０年７月１７日江苏省卫生健康委员会迅速响应国务院应对ＣＯＶＩＤ⁃１９联防联控机制统一部署，紧急抽调２１名分子检验领域的精英人员组建江苏省检验医疗队驰援新疆㊂７月１８日第一批检测队随行携带全套仪器设备及耗材（８台核酸提取仪和６台荧光ＰＣＲ仪等７２件）㊁检测试剂（２．４万人份）和各类防护物资，奔赴新疆㊂该文以实时荧光ＲＴ⁃ＰＣＲ法为技术平台，总结在新疆２０１９⁃ｎＣｏＶ筛查核酸检测工作中的经验，为未来可能出现的ＣＯＶＩＤ⁃１９或其他突发公共卫生事件的大规模人筛查核酸检测提供参考㊂１㊀实验室建设
㊀㊀由于新疆当地医院不能提供标准化ＰＣＲ实验室，根据工作流程和生物安全要求，首先对院方提供的场地进行改造㊂以实时荧光ＲＴ⁃ＰＣＲ法为技术平台，实验室需单一走向
的专用走廊，并划分３个操作区：试剂准备区（Ⅰ区）㊁样本制备区（Ⅱ区）㊁扩增检测区（Ⅲ区），每个区均设置缓冲间（图
１）㊂缓冲间进深至少１．５ｍ，可用于检测人员脱防护用品等㊂标本先送至Ⅱ区缓冲间，再进入Ⅱ区㊂在常规３个操作区的基础上增设１个实验前区（准备区），用于耗材防护物资存放及工作人员穿戴三级防护用品㊁提取试剂及耗材带入Ⅱ区前的拆包等㊂Ⅰ区㊁Ⅱ区㊁Ⅲ区房间的面积分别至少为１０ｍ２㊁４０ｍ２㊁４０ｍ２㊂各区常压，每区之间通过传递窗传递物品㊂Ⅱ区和Ⅲ区外墙装１ ２个强力换气扇㊂各区移动紫外车１ ３台㊂每个分区都有明确的标识，并且每个分区内的区域㊁仪器设备等标识清晰㊂
在实验室的改造过程中，有几点值得注意，因各区常压，尽量选择通风良好的房间，根据单一流向的要求开门封门㊁安装传递窗，根据各区面积配备移动紫外线车㊂三区根据扩增仪的数量安装相应制冷设备，如空调或冷气扇
㊂
注
：走廊走向
；传递窗；门
；封闭
；窗户
图１㊀ＰＣＲ实验室改造示意图
１．１㊀主要仪器设备㊀试剂准备区（Ⅰ区）：超净工作台１ ２台，５ ５０μＬ可调８通道移液器１把，
单通道移液器组合（１ １０μＬ㊁５ ５０μＬ㊁１０ ２００μＬ㊁２００ １０００μＬ）１套，移液器架㊁振荡器㊁掌式离心机各１台，冰柜１ ２台（－２０ħ，存放扩增试剂），可移动紫外车２台等㊂样本制备区（Ⅱ区）：生物安全
柜２ ３台，９６孔全自动核酸提取仪，５ ５０μＬ可调８通道移液器１把，２００ １０００μＬ单通道移液器４把，移液器架３个，振荡器２个，８联管及９６孔板掌式离心机各１台，台式高速冷冻离心机㊁恒温设备如金属浴１个或孵箱㊁展示柜（４ ８ħ）２台㊁冰柜（－２０ħ）１台㊁可移动紫外车２台㊁洗眼器㊂
㊃
８３８㊃临床检验杂志２０２０年１１月第３８卷第１１期㊀ＣｈｉｎＪＣｌｉｎＬａｂＳｃｉ，Ｎｏｖ．２０２０，Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．１１
扩增检测区（Ⅲ区）：实时荧光定量ＰＣＲ仪㊁电脑㊁ＵＰＳ电源㊁可移动紫外车２台等㊂
核酸检测结果阳性参考值阴性１．２㊀仪器配量㊀我队由２１名队员组成，实际工作中运行４台提取仪（９６孔，全自动），８台实时荧光定量ＰＣＲ仪，即１台提取仪配比２台ＰＣＲ仪，这个配比可在保证扩增仪轮休的情况下，达到最大检测能力（每台扩增仪日最大检测能力为１０００管）㊂
１．３㊀试剂及其他设备㊁耗材
试剂：使用原装配套的提取试剂和扩增试剂，复检试剂为另一品牌扩增试剂㊂
其他设备：对讲机４ ５个，７５％酒精，大中小黄医疗垃圾袋（大量），大小黄医疗垃圾桶各８ １０个，锐器盒（大量），酒精喷壶１０ ２０个，穿衣镜２个，洗手衣（手术服）（每人ȡ２套），含氯消毒片，高压蒸汽灭菌器２个㊂
耗材：大量加长型带滤芯无核酸酶头（１０μＬ㊁５０μＬ㊁２００μＬ㊁１０００μＬ）㊁配液槽㊁８连管㊁９６孔板及配套封膜，封口袋等㊂
试剂耗材的补给：由当地医院提供㊂
２㊀生物安全防护
㊀㊀新冠病毒核酸检测是一项风险较高的操作，生物安全防护极为重要㊂根据实验室分区的功能不同及其风险程度，选择合适的个人防护物品保护检测人员安全㊂Ⅰ区和Ⅲ区的人员采取二级生物安全防护，Ⅱ区人员采取三级生物安全防护㊂抵达当地医院后，由院方院感科工作人员首先对我队全体队员进行三级生物安全防护的再培训，尤其是防护服的穿脱，并现场进行考核，所有队员均合格㊂
３㊀实验流程
３．１㊀标本交接流程㊀标本首先送到当地医院的检验科，由检验科核对信息并重新编号，按１ ９０㊁１０１ １９０㊁２０１ ２９０  的编号规则进行编号㊂标本的编号以一个自然日为周期，当日标本全部清零，次日再重新开始编号㊂检验科将已编号样本送至我队实验室，并进行交接登记㊂Ⅱ区队员收到样本后，首先核对样本编号，确认无误后进入检测流程㊂由于大规模筛查样本量非常大，并且一旦发现异常标本，需要迅速且准确无误地在几千标本中出该样本，进入复检和上报程序，这就需要样本的唯一编号清晰且适合抓取，这种编号方式不但方便流程记录表书写（表１），而且也便于Ⅱ㊁Ⅲ区实验人员及时准确地沟通㊂
３．２㊀检测流程㊀每组队员提前到达实验室，进行实验前的准备工作，根据工作量在实验前区拆取提取试剂及头盒外包装，一方面可提高在Ⅱ区的工作效率，为标本检测争取更多的时间；另一方面大量减少需高压灭菌的医疗废物，降低消毒压力㊂根据分工，穿戴相应防护用品，２名队员穿戴好二级防护后，１人迅速进入Ⅲ区判读并发布前一组交班的结果，１人进入Ⅰ区配试剂㊂其余队员穿戴好三级防护，携带所需耗材进入Ⅱ区工作㊂Ⅰ区队员完成本组所需试剂的配制后更换三级防护进入Ⅱ区参与样本提取工作，形成 Ⅱ区４人㊁Ⅲ区１人 的工作模式㊂考虑到不同实验室的人员储备㊁提取仪数量等，建议每检测组最少５人，Ⅰ区㊁Ⅱ区及Ⅲ区人员配比最好是按１ʒ４ʒ１来安排㊂
表１㊀上机检测样本编号记录表
１２３４５６７８９１０１１１２Ａ０１０９１７２５３３４１４９５７６５７３８１８９Ｂ０２１０１８２６３４４２５０５８６６７４８２９０Ｃ０３１１１９２７３５４３５１５９６７７５８３
Ｄ０４１２２０２８３６４４５２６０６８７６８４阴性Ｅ０５１３２１２９３７４５５３６１６９７７８５环评１Ｆ０６１４２２３０３８４６５４６２７０７８８６环评２Ｇ０７１５２３３１３９４７５５６３７１７９８７
Ｈ０８１６２４３２４０４８５６６４７２８０８８阳性㊀㊀注：从第１列开始编号，Ａ Ｈ行分别为０１ ０８号样本，第２列Ａ Ｈ行分别为０９ １６号样本，后面依次类推；第１２列空着的２个孔位，为异常结果标本复检孔；阴性，阴性对照；阳性，阳性对照；环评１，环境评价１；环评２，环境评价２㊂
㊀㊀Ⅱ区队员在提取时，标本号及提取板的编号要一一对应，每次提取结束后用７５％酒精擦拭提取仪内部，并至少１０ｍｉｎ的紫外灯照射㊂每板结果判读后，Ⅲ区通过对讲机及时将异常结果标本信息反馈至Ⅱ区，以便异常结果标本第一时间复查，并及时清理阴性标本，当班未能复查的异常结果样本及其提取液暂存于Ⅱ区冷藏柜，并标注日期等信息，同时做好交接班记录㊂Ⅱ区人员结束工作后，用７５％酒精擦拭生物安全柜㊁台面及提取仪的内外表面，打包带走所有医疗垃圾，开启紫外灯消毒并开窗通风㊂Ⅲ区人员在每板扩增结束后，关闭ＰＣＲ仪电源，上报结果并用７５％酒精擦拭ＰＣＲ仪内部，空置
３０ｍｉｎ后再使用，以保证ＰＣＲ仪的可持续运行㊂为保证标本的可溯源性，每个分区都有对应的流程表，并要求填写完整，不能有空项㊂要有风险意识，随手关门㊂３．３㊀结果上报及复检原则㊀每板结果出来后，Ⅲ区队员首先参考扩增试剂说明书判断阴性对照㊁环境评价和阳性对照是否在控，若失控需立即查原因，并整改㊂在阴性对照㊁环境评价和阳性对照均在控的情况下进行结果分析，若有内参未检出的标本，立即原管复检；若出现ＯＲＦ１ａｂ或Ｎ基因单靶位点阳性则不上报，立即使用双试剂复检；若ＯＲＦ１ａｂ及Ｎ基因双靶位点阳性第一时间上报，同时立即双试剂复检㊂在记录流程表时，填写复检标本的孔位，初始Ｃｔ值及复检Ｃｔ值，并做好交接班记录㊂
３．４㊀意外事件／事故处理流程
３．４．１㊀标本溢洒的处理流程㊀当出现标本溢洒时，首先在溢洒区域铺上纱布（完全覆盖），而后用５０００ｍｇ／Ｌ的含氯消毒液喷洒在纱布上，作用３０ｍｉｎ以上，再将纱布小心移除㊂清理过程中避免接触污染物，清理的污染物按感染性废物处置㊂清除污染物后，用１０００ｍｇ／Ｌ的含氯消毒液喷洒物体表面，最后开紫外灯进行消毒㊂
３．４．２㊀实验室环境的消毒流程㊀当进行实验室环境消毒时，首先用１０００ｍｇ／Ｌ含氯消毒液擦拭物体表面㊁地面以及提取仪㊁ＰＣＲ仪㊁生物安全柜㊁超净台等的内部，之后用７５％乙醇进行重复擦拭消毒，最后开紫外灯进行消毒㊂
４㊀人员
㊀㊀领队１人㊁队长１人㊁秘书１人，检测人员最少需１８ ２０人，每名队员均具备ＰＣＲ资质并熟练掌握核酸提取㊁核酸扩增技术和生物安全防护技能，每队至少１人具有特种设备从业人员资质㊂检测队员分组，若分３组，每组６人，每班工作
６ｈ；若分４组，每组５人，每班工作５ｈ㊂同时，根据工作量及标本送达时间，随时调整班次，尽可能保证队员休息，保证持续战斗能力㊂
注意队员健康监测，每天２次体温测量，每周做１次核酸检测㊂加强队员心理疏导，通过开展党组织生活会及小组交流㊁谈心等多种方式，舒缓队员压力，使队员保持积极乐观的心态，避免出现焦虑情绪和抑郁状态，并时刻保持良好的自我防护意识㊂
检测医疗队返程后，队员采取居家隔离㊂居家隔离时应选择家庭中通风较好的房间隔离，每天上午和下午各测量１次体温，并尽可能减少与其他家庭成员接触等［１］㊂
５㊀混采而不混检
㊀㊀对于口咽拭子的采集，可混采不可混检，以确保结果的准确性和可靠性［２］㊂援疆期间，混采标本从５合１到一家人合１，最大量到１０合１㊂混检本身是一个稀释的过程，在检测方法的检出限相同
的情况下，很容易漏检病毒载量较低的阳性标本，而混采则极大地降低了漏检率㊂而我队在援疆期间就遇到因标本稀释差点漏检的情况，有１例标本５ʒ１混采检测出强阳性（双靶点Ｃｔ值均为２７），但５个单采的标本因其他单位检测后稀释２倍送至我队实验室，３种品牌的扩增试剂㊁３台不同的ＰＣＲ仪重复做，只有一次实验检测出Ｎ基因且Ｃｔ值为３８．３，其余均未检出㊂
６㊀小结与展望
㊀㊀在援疆期间，为应对大批量检测需要，缩短报告时间，完成防控指挥部下派的检测任务，我队多次梳理和优化了检测流程以及交接班规定等，强调操作规范化㊁标准化，高效率㊁高质量地完成了核酸检测任务㊂疫情就是命令，防控就是责任，实验室就是战场㊂战时状态，最讲究时效性，第一时间抓住异常病例，第一时间双试剂复查，第一时间报告，以便做到第一时间隔离㊂
总结我队本次援疆之行经验，概括为３点：（１）各类标识标志明确，实验室有明确分区，每个分区内也有明确标识；（２）流程标准规范，完整准确的流程表可保证样本结果的可溯源性，这对于在大规模筛查中准确到异常样本至关重要；（３）技术能力过硬，我队队员既是检测人员，也是仪器工程师㊂援疆期间，在仪器工程师无法到场支援的情况下，能够迅速地发现并自行解决遇到的各种问题，保证仪器高效运转㊂同时，自治区政府和当地医院在生活㊁交通㊁试剂保障等各方面均给予了大力支持㊂所有人共同努力，克服各种困难，完成了艰巨的核酸检测任务，甚至创造了单日检测量
８４０５管的纪录㊂
对于ＣＯＶＩＤ⁃１９患者早发现㊁早报告和早隔离，是控制疫情传播的首要任务㊂而快速有效的２０１９⁃ｎＣｏＶ实验室检测则显得非常迫切，这对实验室人员提出了更高的要求，要做好生物安全防护工作，严格按照标准操作规程实施２０１９⁃ｎＣｏＶ检测工作，做好标本检测的全程质量控制工作，提高病毒检出率，更好地应对未来可能出现的ＣＯＶＩＤ⁃１９或其他突发公共卫生事件的大规模人筛查核酸检测㊂执笔：薛娴（南京医科大学第二附属医院），董苏荣（泰州市人民医院），王颖（淮安市第一人民医院）
江苏省援疆核酸检测医疗队名单
许斌（江苏省肿瘤医院㊁江苏省临床检验中心），董苏荣（泰州市人民医院），裴豪（无锡市第五人民医院），束国防（东南大学附属中大医院），薛娴（南京医科大学第二附属医院），王颖（淮安市第一人民医院），赵鸿（江苏省人民医院），孙靖（常州市第一人民医院），李妍（南京医科大学附属逸夫医院），张哲雄（连云港市第二人民医院），熊御云（江苏大学附属医院），陈相（南通市第一人民医院），孙宝兰（南通大学附属医院），宋妙丽（苏州市立医院），余汉忠（徐州市第一人民医院），李颖（徐州医科大学附属医院），罗富银（高邮市人民医院），刘志明（南京市浦口区中心医院），张发（南京市浦口区中心医院），曹风华（镇江市中西医结合医院），邵可可（盐城市第一人民医院）㊂
７㊀参考文献
［１］国家卫生健康委员会办公厅．新型冠状病毒感染的肺炎防控中居家隔离医学观察感染防控指引（试行）［ＥＢ／ＯＬ］．（２０２０⁃０２⁃０４）．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｏｖ．ｃｎ／ｚｈｅｎｇｃｅ／ｚｈｅｎｇｃｅｋｕ／２０２０⁃０２／０５／ｃｏｎｔｅｎｔ＿５４７４６８８．ｈｔｍ．
［２］国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制医疗救治组．关于印发新冠病毒核酸１０合１混采检测技术规范的通知［ＥＢ／ＯＬ］．（２０２０⁃０８⁃１７）．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｏｖ．ｃｎ／ｘｉｎｗｅｎ／２０２０⁃０８／１９／ｃｏｎ⁃ｔｅｎｔ＿５５３５７５６．ｈｔｍ．
（收稿日期：２０２０⁃０９⁃２７）
（本文编辑：刘）