(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810595725.8
(22)申请日 2018.06.11
(71)申请人 北京大学人民医院
地址 100044 北京市西城区西直门南大街
11号科教楼807A室
(72)发明人 阮国瑞　刘开彦　张加敏　黄晓军　
张静　
(74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限
公司 11245
代理人 关畅
(51)Int.Cl.
C12Q  1/6886(2018.01)
(54)发明名称DPEP1在作为评估成人B-ALL患者预后风险标记物中的应用(57)摘要本发明公开了DPEP1在作为评估成人B-ALL 患者预后风险标记物中的应用。本发明保护用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA的检测物的应用：制备用于B-ALL患者预后风险评估的产品、评估B-ALL患者预后风险、制备用于B-ALL患
者预后复发率评估的产品、评估B-ALL患者预后复发率、制备用于B-ALL患者预后无复发生存率评估的产品、评估B-ALL患者预后无复发生存率。实验证明，DPEP1高表达是成人普通B-ALL患者CIR和RFS的独立危险因素，且其对预后的影响在无造血干细胞移植的患者中更为显著。本发明在B-ALL的分
层诊断和预后评估中具有重要的应用价值。
权利要求书1页  说明书9页序列表3页  附图1页CN 108707669 A 2018.10.26
C N  108707669
A
1.用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA的检测物在如下(A)或(B)或(C)或(D)或(E)或(F)中的应用：
(A)制备用于B -ALL患者预后风险评估的产品；
(B)评估B -ALL患者预后风险；
(C)制备用于B -ALL患者预后复发率评估的产品；
(D)评估B -ALL患者预后复发率；
(E)制备用于B -ALL患者预后无复发生存率评估的产品；
(F)评估B -ALL患者预后无复发生存率。
2.用于评估B -ALL患者预后风险的产品，含有用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA的检测物。
3.用于评估B -ALL患者预后复发率的产品，含有用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA的检测物。
4.用于评估B -ALL患者预后无复发生存率的产品，含有用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA 的检测物。
5.如权利要求2、3或4所述的产品，其特征在于：所述产品还包含数据处理装置；所述数据处理装置内设模块；所述模块具有如下(a1)和(a2)所示的功能：
(a1)以由若干名未采取任何措施的B -ALL患者组成的待测体的离体骨髓为标本，测定每份标本中所述mRNA的表达量，然后按照所述mRNA的表达量由低到高的顺序将所述待测体进行排列并二等分，将表达量低的1/2所述待测体作为DPEP1低表达组，将其余1/2所述待测体作为DPEP1高表达组；
(a2)按照如下标准确定来自于所述待测体的待测者的预后风险和/或预后复发率和/或预后无复发生存率：“来自于所述DPEP1低表达组中的待测者”的预后风险和/或预后复发率低于或候选低于“来自于所述D
PEP1高表达组中的待测者”；“来自于所述DPEP1低表达组中的待测者”的预后无复发生存率高于或候选高于“来自于所述DPEP1高表达组中的待测者”。
6.如权利要求1所述的应用、或、权利要求2至5任一所述的产品，其特征在于：所述检测物选自如下：用于检测所述mRNA的特异性扩增引物和/或探针。
7.如权利要求6所述的应用、或、权利要求6所述的产品，其特征在于：所述检测物为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对，和/或，由序列表中序列3所示的单链探针。
8.一种B -ALL患者预后风险评估方法，包括如下步骤：检测待测患者单个核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平，“单个核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平高”的待测患者预后风险高于“单个核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平低”的待测患者。
9.一种B -ALL患者预后复发率评估方法，包括如下步骤：检测待测患者单个核细胞DNA 中DPEP1基因的转录水平，“单个核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平高”的待测患者预后复发率高于“单核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平低”的待测患者。
10.一种B -ALL患者预后无复发生存率评估方法，包括如下步骤：检测待测患者单个核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平，“单个核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平高”的待测患者预后无复发生存率低于“单个核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平低”的待测患者。
权　利　要　求　书1/1页CN 108707669 A
DPEP1在作为评估成人B-ALL患者预后风险标记物中的应用
技术领域
[0001]本发明属于生物医药领域，具体涉及DPEP1在作为评估成人B细胞急性淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia，B-ALL)患者预后风险标记物中的应用。
背景技术
[0002]B-ALL是成人最常见的ALL类型，危险分层和方式的进步显著改善了患者的预后，但成人B-ALL复发率高，总体预后仍较差，长期生存仅为30％-40％。目前的危险度分层根据年龄、初诊白细胞计数、染体核型、中枢神经系统受累以及对初始的反应等将患者分为标危和高危。但值得注意的是，标危患者中仍有部分患者复发，提示目前的危险度分层仍有待精准化，因此新的预后相关分子标记物的发现和验证对于更精确的危险度分层十分必要，且可能提供靶点。
[0003]二肽酶1(Dipeptidase1，DPEP1)是一种位于16q24.3染体的锌金属肽酶也被称为膜二肽酶、微粒体二肽酶或肾二肽酶，是一种能水解多种二肽并参与谷胱甘肽代谢的锌金属肽酶，并在谷胱甘肽以及肿瘤相关的促炎分子白三烯的调控中起着重要作用。目前关于DPEP1的研究报道提示其表达与肿瘤的形
成及进展有着十分密切的关系。已有报道DPEP1在结肠癌中上调，与不良预后相关。
发明内容
typec转dp[0004]本发明的目的是评估成人B-ALL患者经过(如经过实施例1中)后的预后风险。
[0005]本发明首先保护用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA的检测物在如下(A)或(B)或(C)或(D)或(E)或(F)中的应用：
[0006](A)制备用于B-ALL患者预后风险评估的产品；
[0007](B)评估B-ALL患者预后风险；
[0008](C)制备用于B-ALL患者预后复发率评估的产品；
[0009](D)评估B-ALL患者预后复发率；
[0010](E)制备用于B-ALL患者预后无复发生存率评估的产品；
[0011](F)评估B-ALL患者预后无复发生存率。
[0012]本发明还保护一种用于评估B-ALL患者预后风险的产品，可含有用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA的检测物。
[0013]本发明还保护一种用于评估B-ALL患者预后复发率的产品，可含有用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA的检测物。
[0014]本发明还保护一种用于评估B-ALL患者预后无复发生存率的产品，可含有用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA的检测物。
[0015]上述任一所述的产品还可包含数据处理装置；所述数据处理装置内设模块；所述模块具有如下(a1)和(a2)所示的功能：
[0016](a1)以由若干名未采取任何措施的B-ALL患者组成的待测体的离体骨髓为标本，测定每份标本中所述DPEP1mRNA的表达量，然后按照所述mRNA的表达量由低到高的顺序将所述待测体进行排列并二等分，将表达量低的1/2所述待测体作为DPEP1低表达组，将其余1/2所述待测体作为DPEP1高表达组；
[0017](a2)按照如下标准确定来自于所述待测体的待测者的预后风险和/或预后复发率和/或预后无复发生存率：“来自于所述DPEP1低表达组中的待测者”的预后风险和/或预后复发率低于或候选低于“来自于
所述DPEP1高表达组中的待测者”；“来自于所述DPEP1低表达组中的待测者”的预后无复发生存率高于或候选高于“来自于所述DPEP1高表达组中的待测者”。
[0018]本发明还保护一种B-ALL患者预后风险评估方法，可包括如下步骤：检测待测患者单个核细胞mRNA中DPEP1基因的转录水平，“单个核细胞mRNA中DPEP1基因的转录水平高”的待测患者预后风险高于“单个核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平低”的待测患者。[0019]本发明还保护一种B-ALL患者预后复发率评估方法，可包括如下步骤：检测待测患者单个核细胞mRNA中DPEP1基因的转录水平，“单个核细胞mRNA中DPEP1基因的转录水平高”的待测患者预后复发率高于“单核细胞DNA中DPEP1基因的转录水平低”的待测患者。[0020]本发明还保护一种B-ALL患者预后无复发生存率评估方法，可包括如下步骤：检测待测患者单个核细胞mRNA中DPEP1基因的转录水平，“单个核细胞mRNA中DPEP1基因的转录水平高”的待测患者预后无复发生存率低于“单个核细胞mRNA中DPEP1基因的转录水平低”的待测患者。
[0021]上述任一所述的方法中，所述“检测待测患者单个核细胞mRNA中DPEP1基因的转录水平”可采用所述用于检测编码DPEP1蛋白的mRNA的检测物进行。
[0022]在本发明中，所述检测物可为任何能够实现对所述mRNA进行定量检测的试剂和/或仪器。具体可选自如下中任一种：用于检测所述mRNA的特异性扩增引物和/或探针。对所述mRNA进行定量检测包括但不限于：设计DPEP1的PCR引物使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测DPEP1的mRNA。
[0023]在本发明中，所述检测物具体可为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链核苷酸组成的引物对，和/或，由序列表中序列3所示的单链探针。所述单链探针的5’端可标记有荧光报告基团(如FAM)。所述单链探针的3’端可标记有荧光猝灭基团(如BHQ)。
[0024]上述任一所述检测物还可包括用于检测内参基因mRNA的特异性扩增引物和/或探针。所述内参基因具体可为ABL1基因(GenBank：NM_005157)。检测ABL1基因mRNA的特异性扩增引物为ABL1-FP：5’-TGGAGATAACACTCTAAGCATAACTAAAGGT-3’和ABL1-RP：5’-G A T G T A G T T G C T T G G G A C C C A-3’。检测A B L1基因m R N A的探针为5’-F A M-CCATTTTTGGTTTGGGCTTCACACCATT-BHQ-3’。
[0025]在本发明中，所述预后风险为经过实施例1中相应后的预后风险。所述预后风险的高低具体可体现为如下指标中的全部或部分：累积复发率(CIR)和无复发生存率(RFS)。累积复发率(CIR)越低和/或无复发生存率(RFS)越高，则预后风险越低。累积复发率(CIR)越高和/或无复发生存率(RFS)越低，则预后风险越高。从第1次完全缓解至第1次复发或死亡的日期确定累积复发期。从第1次完全缓解至首次复发日期确定无复发生存期。[0026]本发明中，所述DPEP1蛋白的氨基酸序列如序列表中序列4所示。所述编码DPEP1蛋
白的mRNA的序列如序列表中序列5所示。DPEP1的NCBI基因库序列号为：XM_024450173。[0027]上
述任一所述B-ALL患者可为成人(14岁以上)B-ALL患者。所述成人(14岁以上)B-ALL患者具体可为成人(14岁以上)普通B-ALL患者。
[0028]本研究首次研究DPEP1基因对成人B-ALL预后的影响，并发现DPEP1高表达是成人普通B-ALL患者CIR和RFS的独立危险因素，且其对预后的影响在无造血干细胞移植的患者中更为显著。本发明可能在B-ALL的分层诊断和预后评估中发挥重要作用。
附图说明
[0029]图1为DPEP1转录水平与成人普通B-ALL患者累计复发率和无复发生存率的分析。A 为成人普通B-ALL患者DPEP1高表达组和DPEP1低表达组的累积复发率曲线；B为成人普通B-ALL患者DPEP1高表达组和DPEP1低表达组的无复发生存率曲线。
[0030]图2为DPEP1转录水平在成人普通B-ALL患者的方案(无造血干细胞移植vs.造血干细胞移植)中对累计复发率和无复发生存率的影响。A为未进行造血干细胞移植的成人普通B-ALL患者中，DPEP1高表达和低表达对累积复发率的影响；B为未进行造血干细胞移植的成人普通B-ALL患者中，DPEP1高表达和低表达对无复发生存率的影响；C为进行造血干细胞移植的成人普通B-ALL患者中，DPEP1高表达和低表达对累积复发率的影响；D为进行造血干细胞移植的成人普通B-ALL患者中，DPEP1高表达和低表达对无复发生存率的影响。
具体实施方式
[0031]以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量实验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0032]实施例1、DPEP1高表达—成人B系急性淋巴细胞白血病潜在的独立危险因素[0033]一、研究对象与方法
[0034](一)研究对象
[0035]1、入组标准
[0036]收集2008年12月至2015年9月北京大学人民医院初诊为B-ALL的132例患者作为研究组。入选标准：①年龄≥14岁；②符合B-ALL标准诊断(参照WHO关于前体B和T细胞肿瘤分类标准)；③均为初诊，未进行任何相关。另选择43例进行造血干细胞移植的健康供者作为对照组，入选标准：①年龄≥14岁；②经检查排除血液系统疾病。本研究经我院伦理委员会批准。患者或患者监护人(若患者年龄<18岁)均签署知情同意书。
[0037]2、诊断、危险度分层和反应
[0038]骨髓穿刺和活检的细胞形态学分析根据WHO分类标准，同时结合细胞化学方法，采用流式细胞术常规检测免疫表型，应用实时荧光定量PCR方法检测ALL相关融合基因。Pro B-ALL定义为CD10-，CD19+，cCD79a+，cCD22+以及TdT+；Pre B-ALL定义为胞浆μ+，slg-，CD10 +/-；普通B-ALL定义为CD10，CD19，CD22和CD79a表达以及表面Ig-[Bassan R，Gatta G，Tondini C，Willemze R.Adult acute lymphoblastic leukaemia.Crit Rev Oncol Hematol.2004；50：223–61.和J.Jaso，D.A.Thomas，K.Cunningham，J.L.Jorgensen，