细胞壁中多糖含量检测步骤37度
细胞壁中多糖含量检测步骤
1.取新鲜植物组织，迅速置入液氮中，于-80度保存直至使用。
2.在液氮中充分研磨，冷冻干燥植物组织
3.称取12-15mg固体粉末
4.加入750ul 70%乙醇，涡旋震荡，50度水浴15min，期间每2-3min混
匀一次，12,000rpm离心10min，弃上清
5.重复4.两次
6.加入750ul 1:1 氯仿：甲醇，涡旋震荡，50度水浴15min，期间每2-3min
混匀一次，12,000rpm离心10min，弃上清
7.重复6.两次
8.准备pH=5.5 200mM的醋酸钠缓冲液，反应前加入终浓度为10U/ml
alpha淀粉酶和1U/ml淀粉葡糖苷酶（购于Sigma），配置淀粉水解酶反应液
9.向残留的粉末中加入1.2ml淀粉水解酶反应液，37度16h，12,000rpm
离心10min，弃上清
10.加入1ml ddH2O，涡旋震荡，12,000rpm离心10min，弃上清
11.重复10.一次
12.称量残渣的重量
13.将残渣转移至钳口瓶，加入1ml三氟乙酸，110度烘箱水解6h，冷却
后用甲醇定容至10ml，取2ml氮吹仪吹干，加入1ml 0.3M NaOH充分溶解残渣后用HPLC检测