ＡＰＰ／ＰＳ１
双转基因小鼠的繁育、鉴定及评价 谭
龙１，２，李海强１，４，李宜波１，３
，刘
伟１，庞伟１，蒋与刚１
△（１．军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所，天津３０００５０；２．天津医科大学公共卫生学院，天津３０００７０
；３．天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津３００４５７；４．烟台高新技术开发区医院，烟台２６４００６
）【摘要】目的：评价ＡＰＰ／ＰＳ１双转基因小鼠基因表达及认知行为能力的变化，为ＡＤ的相关研究提供有效的动物模型。方法：采用雄、雌鼠１：１合笼配对的方式，令ＡＰＰ／ＰＳ１双转基因小鼠自然交配进行繁育。ＰＣＲ鉴定ＡＰＰ／ＰＳ１双转基因鼠仔鼠的基因型后，选择ＡＰＰ／ＰＳ１阳性小鼠作为模型（ＡＤ）组，同批ＡＰＰ／ＰＳ１阴性为对照（ＣＴ）组，每组８只小鼠。以Ｍｏｒｒｉ
ｓ水迷宫实验检测仔鼠的空间学习记忆能力，以ＨＥ染、刚果红染观察仔鼠脑片组织病理学改变。结果：①ＡＰＰ／ＰＳ１双转基因鼠仔鼠基因经ＰＣＲ扩增，出现约３６０ｂｐ的目的基因条带，表明成功繁育出转入ＡＰＰ／ＰＳ１基因的仔鼠；②Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验结果显示，与７月龄阴性小鼠（ＣＴ组）比较，同月龄的双转基因ＡＤ组小鼠的空间学习记忆能力明显降低（Ｐ＜０．０５）；③ＨＥ染结果显示，ＡＤ组小鼠海马结构及细胞形态出现明显异常；刚果红染结果显示，ＡＤ组小鼠脑片组织出现β淀粉样蛋白斑块沉积。结论：ＡＰＰ／ＰＳ１双转基因小鼠较好地模拟了ＡＤ的病理变化及行为学特征，可作为研究ＡＤ发病机制及开发ＡＤ防治药物的实验工具。【关键词】阿尔茨海默病；ＡＰＰ／ＰＳ１；认知功能；病理学【中图分类号】Ｑ９５５
【文献标识码】Ａ
【文章编号】１０００ ６８３４（２０１８）０２ １１１ ０５
【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．５５４１．２０１８．０２７
Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｇｅｎｏｔｙｐｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＡＰＰ／ＰＳ１
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅ
ＴＡＮＬｏｎｇ１，２，ＬＩＨａｉ ｑｉａｎｇ１，４，ＬＩＹｉ ｂｏ１，３，ＬＩＵＷｅｉ１，ＰＡＮＧＷｅｉ１，ＪＩＡＮＧＹｕ ｇａｎｇ
１△（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌａｎｄＯｐｅｒａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｉｌｉｔａｒｙＡｃａｄｅｍｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００５０；２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，ＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７０；３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００４５７
；４．ＹａｎｔａｉＥｃｏｎｏｍｉｃａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＡｒｅａＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｙａｎｔａｉ２６４００６，Ｃｈｉｎａ
）【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆ（ＡＰＰ／ＰＳ１）ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅａｎｄｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｃｈａｎｇｉｎｇｏｆｃｏｇｎｉｔｉｖｅａｎｄｂｅｈａｖｉｏｒａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ｐｒｏｖｉｄｅａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｆｏｒｔｈｅＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ（ＡＤ）
ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＭａｌｅＡＰＰ／ＰＳ１ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅｍａｔｅｄｗｉｔｈｆｅｍａｌｅＡＰＰ／ＰＳ１ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅ，ａｎｄｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆｔｈｅｉｒｆｉｌｉａｌｍｉｃｅｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲ．ＴｈｅＡＰＰ＋／ＰＳ１＋ｍｉｃｅｗｅｒｅａｓｓｉｇｎｅｄｉｎｔｏＡＤｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（ＡＤｇｒｏｕｐ，ｎ＝８），ａｎｄｔｈｅＡＰＰ ／ＰＳ１ ｍｉｃｅｗｅｒｅａｓｓｉｇｎｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ＣＴｇｒｏｕｐ，ｎ＝８）．ＴｈｅＭｏｒｒｉｓｗａｔｅｒｍａｚｅｔｅｓｔｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｌｅａｒｎｉｎｇａｎｄｍｅｍｏｒｙｏｆｍｉｃｅ．Ａｆｔｅｒｔｈａｔ，ｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄａｎｄｔｈｅｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｓａｍ ｐｌｅｄａｎｄｓｔａｉｎｅｄｂｙＨＥａｎｄｃｏｎｇｏｒｅｄｆｏｒｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：①ＡＡＰＰ／ＰＳ１ｇｅｎｏｍｅＤＮＡａｂｏｕｔ３６０ｂｐｓｉｚｅｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄ．ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆｆｅｅｄｉｎｇａｎｄｂｒｅｅｄｉｎｇｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｔｏａｔｔａｉｎＡＰＰ／ＰＳ１ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅ．②Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｗａｓｆｏｕｎｄｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｌｅａｒｎｉｎｇａｎｄｍｅｍｏｒｙｂｅｔｗｅｅｎ７ ｍｏｎｔｈ ｏｌｄＡＰＰ／ＰＳ１ｐｏｓｉｔｉｖｅｍｉｃｅａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅｍｉｃｅ（Ｐ＜０．０５）．③ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＨＥｓｔａｉｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｃｅｌｌｕｌａｒｍｏｒｐ
ｈｏｌｏｇｙｏｆｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆＡＤｍｉｃｅｗｅｒｅｏｂｖｉｏｕｓｌｙａｂｎｏｒｍａｌ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｃｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｐｏｓｉｔｉｖｅａｍｙｌｏｉｄｐｌａｑｕｅｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｂｒａｉｎｓｏｆＡＤｍｉｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＡＰＰ／ＰＳ１ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅｐｒｅｓｅｎｔｔｙｐｉｃａｌｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｂｅｈａｖ ｉｏｒｓｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ．ＴｈｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｏｕｓｅｉｓａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｏｏｌｆｏｒｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆＡＤ．【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ；ＡＰＰ／ＰＳ１；ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ；ｐａｔｈｏｌｏｇｙ
【基金项目】天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目
（１４ＪＣＺＤＪＣ３６１００
）【收稿日期】２０１６ １２ ２０【修回日期】２０１７ １２ ０２
△【通讯作者】Ｔｅｌ：０２２ ８４６５５３３３；Ｅ ｍａｉｌ：ｊｙｇ１９６７＠１２６．ｃｏｍ
阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ
）是一种神经退行性疾病，以进行性的记忆和行为障碍为主
要临床表现，与衰老显著相关［１］。目前，用于ＡＤ研究的动物模型主要有以衰老为基础的动物模型、各
种因素诱发的动物模型及转基因动物模型。自然衰
老模型饲养周期及实验周期长，动物病死率高；快速衰老模型寿命短，不适合长周期实验；人工诱发模型不能完全理想地呈现出ＡＤ的典型病理特征；而ＡＤ
转基因动物模型可从分子水平模拟ＡＤ的发病，
可在较短时间内获得较多量的模型动物［２
］。通过转基因技术建立的ＡＤ模型，主要涉及β淀粉样前体蛋白（ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＰＰ）、早老素１（ｐｒｅｓｅ
ｎｉｌｉｎ，ＰＳ１）、早老素２（ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ，ＰＳ２
）、载脂蛋白Ｅ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＥ，ＡＰＯＥ）、ｔａｕ蛋白等基因［２，３
］，通过转入不同的基因，模型动物可以稳定地表现出不同的
１
１１中国应用生理学杂志，２０１８，３４（２）
典型特征。研究表明，转基因动物能相对较好地模拟ＡＤ的病理学变化［４］。
本研究拟对ＡＰＰ／ＰＳ１双转基因小鼠进行繁育扩种，以获得满足实验需要的动物数量，并通过对小鼠脑组织病理学观察和学习记忆能力的检测，评价该模型模拟ＡＤ的效果，为该模型的应用和推广提供数据基础。
１材料与方法
１．１实验动物
由中国科学院上海生命科学研究院营养科学研究所王福弟教授馈赠的２对ＡＰＰ／ＰＳ１双转基因小鼠。
１．２主要试剂、仪器
引物购自上海生工生物有限公司，血液／细胞／组织基因组ＤＮＡ提取试剂盒、ｄｄＨ２Ｏ、２×Ｔａ
ｑＰＣＲＭａｓｕｅｒＭｉｘ、ＭａｒｋｅｒＩ、６×ＬｏａｄｉｎｇＢｕｆｆｅｒ、ＥＢ、琼脂糖、５×ＴＢＥ缓冲液等均购自天根生化科技有限公司。ＰＣＲ仪（美国Ｂｉｏ Ｒａｄ公司），电泳仪（美国Ｂｉｏ Ｒａｄ公司），ＷＤ ９４０３Ｆ紫外分析仪（北京市六一仪器厂），Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫（上海欣软信息科技有限公司），Ｏｌｙｍ ｐｕｓ ＢＸ４０生物显微镜，ＨＭＩＡＳ ２０００高清晰度彩病理图像分析系统（武汉同济医科大学千屏影像工程公司）。
１．３动物饲养与繁育
繁育采用雄鼠与雌鼠１∶１合笼配对的方式。母鼠妊娠期约为２０ｄ左右，小鼠出生２０ｄ后根据其性别分笼饲养。
１．４基因型鉴定
新生小鼠饲养至１月龄时剪尾进行基因鉴定。１．５ＤＮＡ提取及定量
鼠尾消毒后，剪下２ｍｍ长尾尖组织，使用ＤＮＡ提取试剂盒提取ＤＮＡ。在１２μｌ提取的ＤＮＡ样品中加入１０８μｌｄｄＨ２Ｏ（即稀释１０倍），然后分别测定２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处的吸光度，２６０ｎｍ处吸光度值为１时其浓度约为５０μｇ／ｍｌ双链ＤＮＡ。
１．６ＰＣＲ反应
引物序列如下：上游引物序列：５’ ＡＧＧＡＣＴ ＧＡＣＣＡＣＴＣＧＡＣＣＡＧ ３’，下游引物序列：５’ ＣＧＧＧＧＧＴＣＴＡＧＴＴＣＴＧＣＡＴ ３’，产物大小约３６０ｂｐ。采用Ｍｉｘ体系，反应体系２５μｌ。ＰＣＲ反应程序：９４℃预变性３ｍｉｎ，９４℃变性１５ｓ，５５℃退火３０ｓ，７２℃延伸４５ｓ，１０个循环。９４℃变性１５ｓ，５５℃退火３０ｓ，７２℃延伸４５ｓ，２５个循环。７２℃延伸１０ｍｉｎ，１０℃保温。１．７ＰＣＲ产物电泳
ＰＣＲ产物作１％琼脂糖凝胶电泳，电压１００Ｖ，当溴酚蓝电泳至距凝胶下端１／３处时停止电泳，紫外分析仪拍片分析，目的基因长度为３６０ｂｐ。１．８Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验
根据基因型鉴定结果，将携带目的基因的小鼠分入模型（ＡＤ）组，未携带目的基因的同批小鼠分入对照（ＣＴ）组。按照参考文献［５］方法稍作调整，小鼠７月龄时，各组随机选择８只小鼠进行Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验，小鼠寻平台时间为９０ｓ，如果９０ｓ内未到平台，则将其引至平台并停留１５ｓ，检测其空间学习记忆能力。
１．９病理学观察
Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验结束后，将小鼠麻醉处死，取脑组织置１０％福尔马林溶液中保存。常规脱水、透明、浸蜡、包埋，脑组织连续切片，厚度５μｍ，裱于载玻片上，６０℃烤箱烘烤１ｈ后备用。常规ＨＥ染，封片，光镜下观察脑的形态学变化；同时作刚果红染，显微镜下观察海马、脑皮层部
位橘红的点片状及近似圆形的斑块状结构，即沉积的淀粉样斑块。１．１０统计学处理
采用ＳＰＳＳ１１．５进行数据整理与分析。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫小鼠平台潜伏时间及神经元计数以中位数Ｍ（Ｑ１～Ｑ３）表示，采用两组独立样本的秩和检验对数据进行统计学比较。
２结果
２．１ＡＰＰ／ＰＳ１双转基因小鼠基因型的鉴定
以从小鼠尾中提取的ＤＮＡ为模板进行扩增，ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳后将凝胶在紫外线下曝光，如目的基因在３６０ｂｐ附近出现明显条带（图１），即可确定为携带ＡＰＰ／ＰＳ１基因的小鼠。繁育后获得同批次小鼠３１只。经鉴定，携带ＡＰＰ／ＰＳ１基因的小鼠２０只，阴性小鼠１１只。小鼠编号后，随机选择（采用随机数字表法）８只ＡＰＰ／ＰＳ１阳性小鼠和８只
阴性小鼠进行实验。
Ｆｉｇ．１ＴｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｔｅｓｔｆｏｒＡＰＰ／ＰＳ１ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅＴｈｅｔｈｒｅｅｂｒｉｇｈｔｂａｎｄｓｏｎｔｈｅｌｅｆｔａｒｅｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍＡＰＰ／ＰＳ１ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅ
２．２Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验
２．２．１定向航行实验定向航行实验共持续４ｄ。
２
１
１ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０１８，３４（２）
在此期间观察到，ＡＤ组小鼠对训练的学习和空间记
忆能力较ＣＴ组差，具体表现为ＡＤ组小鼠需要花费更长时间才能到达平台，在连续训练中对寻平台行为的巩固效果也明显劣于ＣＴ组。从实验的第２
天开始，ＡＤ组小鼠需要较长时间到达平台，而实验的第３天和第４天这种表现更明显，两组差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５
，表１）Ｔａｂ．１Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｔｈｅｌａｔｅｎｔｔｉｍｅｉｎｔｈｅｔｒａｉｎｉｎｇｐｈａｓｅｏｆ
ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎｔｒｉａｌｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝８
）Ｇｒｏｕｐ１ｓｔｄａｙ２ｎｄｄａｙ３ｒｄｄａｙ４ｔｈ
ｄａｙ
ＣＴ３２．２
（１２．５～６０．０）３９．９（１８．４～６０．０）２３．６（８．８～５１．９）１６．４（１１．１～２０．３
）ＡＤ
３０．１
（１１．４～５５．９）４３．１（１９．９～６０．０）２８．５（８．６～３６．９） ２５．２（１１．３～５１．２
） ＣＴ：Ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；ＡＤ：Ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ
Ｐ＜０．０５ｖｓＣＴ
定向航行实验训练阶段结束后，将平台隐匿，检测小鼠对训练的记忆能力。结果显示，ＡＤ组小鼠潜
伏时间［６０．０（４．７～６０．０）ｓ］较ＣＴ组［１２．３（４．６～２６．７）ｓ］明显增长，差异具有统计学意义（Ｚ＝２．０６１
，Ｐ＝０．０３９，图２）。２．２．２空间探索实验空间探索实验结果显示，
在平台撤除后ＡＰＰ／ＰＳ１小鼠并无明显的搜索平台的行为，而是较长时间在迷宫中无目的地游动，运动轨迹未显示出小鼠在目标象限有明显的探索倾向（图２），ＡＤ组穿越目标象限区域的次数为５（０，８），明显少于ＣＴ组［１１（４，１４）］（Ｚ＝２．４３０，Ｐ＝０．０１５360搜索app
）
。Ｆｉｇ．２Ｔｈｅｓｗｉｍｍｉｎｇｔｒａｃｋｏｆｍｉｃｅｉｎｔｈｅｐｒｏｂｅｔｒｉａｌ
ＣＴ：Ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；ＡＤ：Ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ
Ｔｈｅｓｍａｌｌｅｒｒｅｄｃｉｒｃｌｅｉｎｔｈｅｆｏｒｔｈｑｕａｄｒａｎｔｉｓｔｈｅｌｏｃ
ａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｉｄｄｅｎｐｌａｔｆｏｒｍ
２．３病理学检查结果
ＨＥ染结果显示，ＣＴ组小鼠的ＣＡ１
区结构正常，神经元细胞排列整齐紧密，锥体细胞核大而圆。ＣＡ３区结构正常，锥体细胞排列紧密整齐，层次清楚，细胞核呈圆形，大而规则，核仁清晰。偶见神经元细胞凋亡（图３）。而ＡＤ组小鼠海马结构及细胞形态出现明显异常，ＣＡ１区及ＣＡ３区部分神经元失去正常结构，细胞排列疏松紊乱、层数减少。锥体细
胞大量丧失、数目减少，细胞联结松懈，细胞周围出现环状带，胞体缩小，细胞核出现固缩、凋亡（图３
，见彩图页Ⅲ）。刚果红染结果显示，ＡＤ组小鼠皮层区间质可见局灶性刚果红染阳性物质，呈小团状结构；而ＣＴ组小鼠皮层区未见刚果红染阳性表达（图４，见彩图页Ⅲ）。
３讨论
ＡＤ的典型病理改变为神经纤维缠结和老年斑，
其中老年斑是由淀粉样蛋白Ａβ沉积引起的［６
］。ＡＰＰｓｗｅ／ＰＳ１模型小鼠最初是由ＤａｖｉｄＢｏｒｃｈｅｌｔ
建立的［７］，他通过两种质粒将Ｍｏ／ＨｕＡＰＰ６９５ｓｗｅ和ＰＳ１ ｄＥ９
基因分别转入细胞，并分别由各自的小鼠朊蛋白启动子元件（ｍｏｕｓｅｐｒｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｍｏｔｅｒｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＰｒＰ）控制其表达。其中，Ｍｏ／ＨｕＡＰＰ６９５ｓｗｅ基因携带有与家族性ＡＤ相关的Ｋ５９５Ｎ／Ｍ５９６Ｌ突变的人源Ａβ前体蛋白，
ＰＳ１ ｄＥ９基因携带有与家族性ＡＤ相关外显子９删除的人源ＰＳ１
变异体，两个突变基因片段被转入同一个基因座，诱导Ａβ蛋白的异常表达
和代谢，导致Ａβ斑块沉积［８］。因此，
进行基因型检测时，目的基因为一个条带。
我们引进了ＡＰＰｓｗｅ／ＰＳ１双转基因小鼠杂合子
种鼠４只（２雄２雌）进行繁育。由于种鼠为杂合子，根据遗传规律，其后代有１／４的概率为阴性纯
合子，所以在使用前必须进行模型效果评价。为此，我们根据基因型检测结果，以同窝别阴性小鼠（阴性纯合子）作为野生型对照，对所获得的阳性ＡＤ模型小鼠进行病理学检查和行为学评价。
该模型小鼠的生长及发育规律与普通小鼠基本相似，但随着其携带的突变ＡＰＰ和ＰＳ１基因效应的累积，在６～７
月龄时，阳性小鼠可在病理学及学习认知能力方面出现类似ＡＤ的典型特征。为评价该特征的稳定性，我们对７月龄小鼠进行病理学及行为学检测。结果表明，７月龄ＡＤ模型小鼠脑组织内出现明显的Ａβ斑块沉积和神经元丢失，且Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验显示该月龄的阳性小鼠学习记忆能力显著下降，与ＡＤ患者表现出类似的病理学和行为学特
征，也与同类的ＡＰＰ／ＰＳ１
转基因小鼠模型相似［９，１０］。同时，对多只该模型小鼠个体的重复实验和观察表明，该ＡＤ小鼠模型遗传性状稳定，具有较好的繁育和扩种能力，由种鼠繁育的第一代小鼠ＡＰＰ／ＰＳ１
基因阳性率约为５０％，在后续的扩种繁育过程中，当传到第三代时小鼠ＡＰＰ／ＰＳ１基因阳性率已达７０％左右。该小鼠模型不仅在症状和体征方面较好地模
３
１１中国应用生理学杂志，２０１８，３４（２）
拟了ＡＤ的特点，在细胞分子水平也表现出类似ＡＤ的特征，且该模型转入的突变基因位点诱发疾病进展相对较慢，发病时间也较晚，适宜用于干预时间较长的实验，这为研究ＡＤ的发病机制，探索防治ＡＤ的药物提供有力的工具。
但是，由于转基因随机整合到小鼠的基因组，外源性基因对于其自身基因组功能的发挥可能存在干扰，所以该模型小鼠普遍表现出繁殖能力降低，抗病能力差，具体表现为每胎所生小鼠数量减少，死亡率高于普通小鼠，创伤后的恢复能力减弱。在模型小鼠的繁育过程中，我们记录到ＡＤ小鼠从出生至７月龄死亡率可达２５％～３０％，明显高于同批次阴性小鼠（＜５％）。关注这一点对需要保种、育种以及实验周期相对较长的研究工作尤为重要。
总之，该模型小鼠较好地模拟了ＡＤ发病的病理学及行为学特征，在较稳定的年龄段出现Ａβ斑块沉积，神经元丢失现象明显，学习记忆能力减退，其发病过程与人类ＡＤ病程非常相似，疾病进展速度相对较缓慢，在细胞、分子水平上也很好地模拟了ＡＤ的特点，在ＡＤ实验研究中具有较高的应用价值。虽然该模型小鼠转入外源突变致病基因后，生殖及抵抗能力出现一定程度的减弱，但这些不足可通过在饲养过程中严格控制饲养条件和环境加以改善。通过转基因技术建立的该小鼠模型，可作为研究ＡＤ发病机制及开发ＡＤ防治药物的有效实验工具。
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