Nanodrop 2000/2000C 分光光度计
V1.0 用户手册
基因有限公司仪器应用技术支持
亲爱的用户，您好！
非常感谢您选购我公司代理的仪器。我们将竭诚为您提供优质的售后服务及免费的专业应用培训。
为了更好地进行仪器的应用培训，我们根据您所选购的仪器特点，将需要您配合准备的工作敬告如下：
1.应用培训内容：仪器操作培训和软件应用培训。仪器操作培训包括：仪器的操作、维护和仪器使用注意事项。软件应用培训包括：用户本次所购买的同仪器配套的所有软件的软件应用培训。
2.培训时间：仪器正式安装调试后，由安装工程师现场培训仪器操作。
3.应用培训中所需准备的试剂、耗材和仪器均需由用户提供，并在系统培训开始前准备好。
4.用户签收售后服务工作报告后，基因公司正式的系统培训内容即完成。您以后在使用的过程中有任何疑问都可以向我们咨询，我们非常乐意为您们解决应用上遇到的问题。
5.在仪器的使用过程中，无论遇到您认为多么微小或繁琐的问题，请您及时和我们联系，一个及时的通知能节约您的时间，也能帮助我们更好的了解仪器和软件。
6.时请您提供：仪器型号、软件名称，版本、错误代码、实验目的、操作系统（98/2k/xp/NT）、维修历史等相关资料。
本守则提的信息仅供参考，本守则包含的所有信息应该是正确和完整的。如果对本守则中的描述有疑问，请参考厂家的英文操作说明。如果由于您的不正当使用而对仪器造成损坏或者导致仪器的性能损伤，本公司将不会对此负责。
1．仪器介绍
仪器描述
Thermo Scientific NanoDrop 2000/2000C分光光度计可以检测0.5-2ul的样本，而且检测是非常高的准确性和重复性。ND2000C分光光度计不仅提供了NanoDrop样品保留专利技术的便利性，也可以使用传统的比皿来进行样本检测。
样本保留系统应用了表面张力来把样本保留在两根检测光纤中间，这使得仪器可以检测较高浓度的样本而不用稀释。应用这个技术，全波长（190－840nm）NanoDrop 2000/2000C分光光度计检测样本的最高浓度是标准比皿的200倍。
仪器规格
NanoDrop 2000/2000C—基座模式
仪器类型： 分光光度计
最小样品量： 0.5ul
波长： 1mm（可以自动调整到0.05mm）
光源： 氙闪烁灯
检测器类型： 2048—象素线型硅CCD阵列
波长范围： 190－840nm
波长准确性： ±1 nm
光谱分辨率： ≤1.8nm（FWHM@Hg 253.7nm）
吸收光精确性： 0.002吸光值（1mm光程）
吸收光准确性： ±2％（257nm波长下，0.76个吸光值）
吸光值范围： 0.02—300（等同于10mm光程时）
检测极限： 2ng/ul dsDNA
最大检测浓度： 15,000ng/ul（dsDNA）
检测时间： <5秒
仪器占地面积; 14cm×20cm
重量： 2kg
样本基座材料： 303不锈钢以及石英光纤
电脑软件editor工作电压; 12V
工作功率： 12－18W（最大30W）
软件兼容性; Windows XP 和Vista（32bit）
NanoDrop 2000C—比皿模式
光束高度： 8.5mm
加热： 37±0.5℃
搅拌： 150－850RPM
光程： 10，5，2，1mm
检测极限： 0.4ng/ul dsDNA
最大检测浓度： 750ng/ul dsDNA
检测时间： <3秒
重量： 2.1 kg
样品保留基座检测
用移液器加1－2ul样品到检测基座上，对于高浓度的核酸和蛋白A280检测，最少可以使用0.5ul的样本。在基座上包埋一根光纤（接受光纤），把待检测样本加到检测基座上，第二根光纤（光源光纤）放下来与液体样本接触，在两根光纤末端形成液柱。由一个脉冲氙灯作为光源并且使用一个线性CCD阵列来检测通过液体的光信号。仪器由一个装由Nanodrop软件的电脑控制，所有试验数据都以workbook（*.twbk） 文件形式保存在电脑中。
基座检测需要的样本量
虽然基座检测时样本的量不是特别关键，但是必须保证两根光纤之间形成完整的液柱，这样才能保证两根光纤之间形成样本液桥。
决定液滴表面张力的主要因素是溶液中水分子的氢键结合力。通常情况下，溶液中所有的溶质（包括：蛋白，DNA，RNA，盐离子，去垢剂分子）都会降低表面张力，因为这些分子能够和水分子的氢键产生作用。虽然一般情况下1ul的样本就足可以检测了，但对于那些表面张力比较小的样本最好使用2ul样本来检测。
现场试验的经验表明下列样本的用量足够得到准确重复性高的检测结果：
核酸水溶液：1ul
纯蛋白：2ul
Bradford，BCA，Lowry或者蛋白Pierce 660nm试验：2ul
微生物细胞悬浮液：2ul
最好使用精确的移液器（0－2ul）和tip头来取样来保证取样的准确。低精确度的移液器（0－10ul或者更大的）很难准确的加1ul样本到检测基座上。如果用户对样本的特征或者移液器精确性不太确认，最好使用2ul样本来做检测。
基座基本使用
1．抬起样品臂，把样品加到检测基座上。
2．放下样品臂，使用电脑上的软件开始吸光值检测。在上下两个光纤之间会自动拉出一个样品柱，然后进行检测。
3．当检测完成后，抬起样品臂，并用干净的无尘纸把上下基座上的样品擦干净。这样擦拭样品就可以避免样品在基座上的残留。
比皿检测
Nanodrop 2000C可以检测最高48mm的10mm光程的比皿。当使用微量，半微量或者超微量的比皿时，我们建议使用周边不透明的比皿，不透明的比皿保证了光穿过样本后全部到达检测器。而透明的比皿会让那些没有透过样本的光也到达检测器，这样会导致检测特别是低浓度样品的检测不准确。
当检测的波长为紫外区域时（<340nm），要使用石英白皿，这样才能透过紫外光。虽然有一些制造商提供紫外透过的一次性塑料比皿，但是即使质量最好的塑料比皿也不能让低于220nm以下波长的紫外光透过，而大部分玻璃和塑料比皿是完全紫外非透过性的。
一般单光束的分光光度计都会推荐相配的比皿，而许多比皿生产厂家都有严格的质控来保证比皿的性能而不用在换比皿时需要校准，这些比皿都可以用在Nanodrop 2000C上。
比皿检测样品量
在样品检测时必须保证比皿中的样品量足够，能够让光线完整穿过样品。2mm的光速从比皿底部以上8.5mm的位置穿过，请参考比皿生产厂家的建议来确定需要的样品体积。
比皿检测基本操作
1．把样品加到比皿中，要保证加入的样品量足够，要盖过光束。
2．抬器样品臂，把比皿查入到仪器中，插入比皿时要注意仪器上面的光路的指向的方向。
3．在做比皿检测时样品臂必须放下来。
4．使用电脑上的软件对仪器进行初始话。
5．当检测完成后，移出比皿，倒出样品，清洗干净比皿。
空白对照和吸收光计算
当Nanodrop 2000/2000C分光光度计做好空白对照后，仪器会自动记录空白参照液的光谱结果并保存起来作为波长的光强度参比值。当进行样品检测时，透过样品的光强度将被记录下来。样品的透过光强度和空白对照的透过光强度按下列公式来计算样品吸光值：
这样，可以通过样本和空白对照的透过光强度来计算特定波长下的吸光值。
通过Beer－Lamber定律来确定样品浓度和吸光值之间的关系：
A＝吸光值（A）
ε＝波长依赖的摩尔消光系数（单位 L/mol*cm）
b＝光程（单位 cm）
c＝样品浓度（单位 mol/L）
参比溶液，或者空白溶液，通常是那些融解靶向分子的溶剂，这个溶剂要和样品溶液具有相同的pH值和离子强度。
基座检测空白循环
我们建议把空白对照当成样品来检测，这样可以确认仪器性能完好并且基座上没有样品残留，按下列操作来运行空白循环：
1．软件中打开将进行的操作模式，把空白对照加到基座上，并把样品臂放下。
2．点击Blank来进行空白对照检测并保存参比图谱。
3．重新加空白对照到基座上，把它当成样品一样来检测，点击Measure来进行检测，结果应该是差不多为一水平线，吸光值变化应不超过0.04A（10mm光程）
4．擦去上下基座上的液体，重生进行上面的操作，直到检测光谱图的变化不超过0.04A（10mm光程）。
虽然不需要在每个样品之间进行空白校准，但我们建议在检测多个样品时，最好每30min进行一次空白校准。30min后，最后一次做空白检测的时间将显示在软件下面的状态栏上。
荧光染料
在进行Micro Array 和Protein & Labels检测时，软件使用Beer－Lambert定律来进行荧光染料计算。用户可以使用Dye/Chrom来编写新的新的染料。下表是软件中保存的染料的参数：
2．软件
电脑配置
Microsoft Windows XP或者Vista（32bit）操作系统
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