新冠核酸PCR上岗证考试题(第一套)
一、选择题(每题2分,共20分)
1、分子诊断定量检测项目室内质控如果出现下列哪种失控规则可考虑随机误差:(C)
A、41s
B、22s
C、R4s
D、10x
2、使用PCR技术检测新冠核酸病毒时,PCR体系所必需的组分是:(C)
①模板②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶⑤16sRNA⑥反转录酶
A、12345
B、23456
C、12346
D、13456
3、在PCR检测中,分析前的质量影响因素包括(D)
A、标本采集室间
B、标本运送时间
C、标本保存时间和温度
D、以上全是
4、清洁PCR仪的反应槽、热盖及生物安全柜等仪器时,最好使用(C)
A、1N盐酸
B、1%次氯酸钠
C、75%乙醇
D、0、2%次氯酸钠
5、在临床基因扩增检验中,弱阳性室内质控品发生失控,常见原因有下述各项,但除外(D)
A、核酸提取中的丢失、有机溶剂的去除不彻底、标本扩增抑制物的残留等
B、扩增仪孔间温度的不均一性
C、Taq酶和/或反转录酶的失活
D、扩增产物的污染
6、在临床基因扩增检验实验室中,影响结果正确与否的重要因素,除了试剂盒质量外,其他还有(D)
A、人员素质
B、仪器设备状态
C、室内指控措施
D、以上全是
7、在PCR中TaqDNA聚合酶与靶核酸的结合发生于下述过程中的哪一阶段(C)
A、变性
B、退火
C、延伸
D、以上都有
8、在一个DNA分子中,如G多占摩尔比为17、2%,则A所占摩尔比为:(B)
A、82、8%
B、32、8%
C、17、2%
D、65、6%
9、如果一个PCR反应体系中加入模板200个,经过30个循环后,理论上扩增产物的数量将达到:(C)
A、200×30×2
B、2002×30
C、200×230
D、200×302
10、新冠病毒核酸检测过程中为最大限度监控实验室假阳性结果,阴性室内质控建议:(D)
A、建议每批检测设立1个阴性质控
B、建议每批检测设立2个阴性质控,二份阴性质控固定
C、建议每批检测设立3个阴性质控,三份阴性质控固定
核酸结果查询平台D、建议每批检测设立3个阴性质控,三份阴性质控随机放在临床样本中间,与待检测样本同时参与全过程检测
二、是非题(每题1分,共10分)
1、处理PCR样本时,在没有生物安全柜的情况下,可用超净台工
作。(X)
2、定量PCR与定性PCR测定原理最主要取得区别在于前者的测定在PCR的指数扩增期,而后者多为扩增平台期。(Y)
3、新冠病毒核酸检测中,结果阴性不能排除病毒感染。(Y)
4、新冠病毒核酸结果判定时,若两个靶标检测结果处于灰区时,需严格按照试剂说明书进行复检及报告。(Y)
5、PCR检测标本处理需在生物安全柜内进行,对具有潜在传染危险性的材料,必须在生物安全柜内开盖。(Y)
6、实验室检测项目无法参加室间质量评价时,可以用室内质控替代。(X)
7、NGS技术检测结果具有很高的准确性,不需要进行性能验证或性能确认。(X)
8、扩增管没有盖好会造成PCR过程中反应液产生热蒸发,直接影响检测结果,但不会成为一个污染源。(X)
9、使用NGS技术可实现对临床样本中包括点突变(SNV)、插入缺失(Indel)、拷贝数变异(CNV)和结构变异(SV)等多种变异的识别。(Y)
10、肿瘤组织FFPE样本进行核酸检测前应由病理医师在显微镜下确认肿瘤细胞性质和含量。Y
三、填空题(每题4分,共20分)
1、普通临床基因扩增检验实验室一般包括下面四个分区:试剂储存和准备区,标本制备区,扩增区,扩增产物分析区。
2、临床基因扩增检验实验室检测用的试剂应当经国家药监局批准。
3、PCR反应基本过程包括高温变性、低温退火、中温延伸。
4、PCR污染的主要污染源有标本间交叉污染和PCR试剂的污染等,预防PCR污染的方法有划定区域和实验流程标准化等。
5、新冠病毒核酸检测假阴性的可能原因:样本质量差,样本收集过早或者过晚,没有正确的保存运输处理,技术本身存在问题,试剂检出现问题。
四、问答题(每题8分,共32分)
1、有一实验室准备开展新冠病毒核酸检测,是否需要做性能验证?如果做,至少需要做哪些参数?该如何做?
需要做性能验证。
1、精密度
2、方法符合率
3、检出限
1、精密度:包括重复性和中间精密度。重复性对样本进行至少10次重复测定,阴阳性符合率≥90%,中间精密度每天检测3到4次,连续检测5天,阴阳性符合率大于等于90%。
2、方法符合率:通过与参比方法进行比较。阴性样本5例,阳性包括弱阳性/低扩增不少10例。
3、检出限:样本是定值标准物质,验证方法:定值标准物质样本梯度稀释至厂家声明的检出限浓度。重复测定5次或不同批内重复测定20次。判断,5次重复检测必须100%检出靶核酸,20检测必须至少18次检出靶核酸。
2、临床分子诊断实验室进行仪器设备的校准过程应注意的关键要素有哪些?
答:1需对仪器的加样系统,温控系统,检测系统进行校准
2需校准/检定仪器:测序仪,扩增仪,杂交仪,生物安全柜,高速冷冻离心机,恒温金属浴,移液器,温度计,温湿度计等
3频度:定期校准(国家计量部门或制造厂商要求进行)。有校准报告
3、感染性疾病的定量、定性检测,人基因组的基因型检测,对上述三类PCR检测的室内质控品浓度水平和型别硬做如何要求?新冠病毒核酸检测的质量控制中,室内质控品应如何设置?
定量测定:2个浓度质控品+1个阴性
注意低值浓度质控品的选择与检测下限的关系。
定性测定:1个阴性+1个弱阳性和/或阳性质控品。
人基因组:1个野生型+1个突变型。
4、有一基因扩增实验室在检测新冠病毒核酸标本时,以新冠病毒核
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